大豆皂苷对d-半乳糖诱导衰老小鼠肾脏抗氧化作用的影响

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目的:探讨大豆皂苷对D-gal诱导衰老小鼠肾脏的抗氧化作用影响。  方法:60只SPF昆明雄性小鼠,随机分为实验空白对照、D-gal模型组、大豆皂苷低剂量(SS25)组、大豆皂苷中剂量(SS50)组、大豆皂苷高剂量(SS100)组和维生素E(VE)组,每组10只。空白组外,其它各组每天在相同部位皮下注射D-gal溶液(300mg/kg),不间断共7周。分别对SS25组、SS50组、SS100和VE组小鼠进行灌胃,剂量分别是25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、50mg/kg。眼球取血与杀鼠取肾脏。1.ELISA法对血清衰老指标8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)指标的检测;2.取部分肾组织进行病理学HE染色;3.部分肾组织匀浆后比色法进行氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)及NO、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的检测;4.试剂盒提取肾脏线粒体,对线粒体Na+K+ATPase、Ca2+Mg2+ATPase与氧化指标锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、丙二醛(MDA)进行检测;;5.蛋白印迹法对COX-2、HO-1重要治疗靶点表达进行检测。  结果:1、对小鼠血清的检测:与空白对照组比较,D-gal模型组8-OHdG水平明显升高(P<0.05),与D-gal组比较,大豆皂苷各处理组8-OHdG含量明显降低(P<0.05);  2、肾组织HE染色结果:空白组,肾小球大小、形态正常,肾小管未见异常,未发现炎细胞浸润。与正常组相比,D-gal模型组肾小球萎缩,部分肾小管上皮细胞肿胀,管腔缩小;与D-gal模型组相比,SS25组肾小管上皮细胞肿胀明显,管腔明显缩小,堵塞,肾小球未见明显萎缩;SS50组有玻璃样变;而SS100组肾小管上皮细胞未见明显肿胀,管腔正常,肾小球大小、形态未见异常;  3、对小鼠肾脏组织氧化指标的检测:与空白对照组比较,D-gal组SOD、GSH-PX、CAT酶活性下降(P<0.05),与D-gal模型组比较,大豆皂苷各剂量组SOD与SS100组GSH-PX、CAT酶活性明显升高(P<0.05);与空白对照组比较,D-gal组MDA水平明显升高(P<0.05),与D-gal组比较,大豆皂苷处理组MDA水平明显下降低(P<0.05);与空白组比较,D-gal组NO水平增高显著(P<0.05),与D-gal组比较,大豆皂苷处理后各剂量组NO水平显著降低(P<0.05);与空白组比较,D-gal模型组耐OS酶活显著增高(P<0.05),与D-gal组比较,大豆皂苷各处理组iNOS酶活降低显著(P<0.05);  4、与空白对照组比较,D-gal组Na+K+ATPase、Ca2+Mg2+ATPase酶活性下降(P<0.05),与D-gal组比较,SS50、SS100组Na+K+ATPase与大豆皂苷处理组Ca2+Mg2+ATPase酶活性明显升高(P<0.05);与空白对照组比较,D-gal组MDA水平明显升高(P<0.05),与D-gal组比较,SS100组MDA水平明显降低(P<0.05);与空白对照组比较,D-gal组MnSOD酶活性下降(P<0.05),与D-gal组比较,SS100组MnSOD酶活性明显升高(P<0.05);  5、蛋白印迹法检测肾组织HO-1、COX-2蛋白表达,与空白对照组比较,D-gal模型组COX-2、HO-1表达明显升高(P<0.05),与D-gal组比较,大豆皂苷处理组COX-2、HO-1表达明显降低(P<0.05);  结论:大豆皂苷对D-半乳糖所致衰老小鼠肾脏衰老有延缓作用;大豆皂苷能提高机体抗氧化能力的作用;大豆皂苷具有抗衰老的作用,其作用机制可能与提高机体抗氧化能力有关。
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