N<'+>注入选育高产β-葡聚糖酶菌株及其发酵条件优化的研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:chengjun_80
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β-葡聚糖酶可以将β-葡聚糖降解为小分子,消除麦类饲料中β-葡聚糖的抗营养作用,从而作为一种饲料添加剂在动物营养界倍受关注,然而,目前,β-葡聚糖酶生产菌大多由于产酶活力低、发酵培养基条件复杂而受到限制。本试验以β-葡聚糖酶生产菌黑曲霉Y2449为研究材料,首先对其液体发酵培养基进行了优化,然后利用低能N+注入技术对β-葡聚糖酶生产菌进行改良,并筛选出一株高产菌株SD16,最后对突变高产菌SD16的最佳发酵培养条件再次进行优化。试验首先通过单因素试验和正交试验对黑曲霉Y2449产β-葡聚糖酶的液体发酵培养基进行了初步研究。确定了黑曲霉菌株的最适培养基组成:大麦粉3%,豆粕粉2%,硝酸胺0.14%,?-葡聚糖0.1%,吐温-80 0.2%,醋酸钠0.1%,抗坏血酸0.1%,碳酸钙0.3%,K2HPO4.3H2O 0.1%,MgSO4.7H2O 0.05%,FeSO4.7H2O 0.001%。使酶活力由原来的40.3 U/ml达到了73.0U/ml,酶活提高显著,这说明适宜的培养基组成有利于菌株的产酶。其次,利用低能N+注入技术对β-葡聚糖酶生产菌进行改良。N+注入的真空条件造成的低温对黑曲霉菌株存活率影响研究表明:真空条件对黑曲霉菌株存活率影响显著,30秒时存活率为82.7%,180秒时已经下降到20%以下,240秒时仅为5.4%。而加甘油保护后其存活率受真空中受影响不大30秒时存活率98.2%,240秒时93.3%。N+注入改良?-葡聚糖酶生产菌的最佳参数研究表明:随着N+注入能量的增加,其存活率随着注入能量的增加而降低,其正突变率却有逐渐上升的趋势;随着N+注入剂量的增加,其存活率曲线为典型的“马鞍型”剂量-效应曲线。确定的最佳离子诱变参数为:能量15KeV、剂量80×2.6×1013 N+/cm2。试验总结了诱变筛选的工艺流程,考察了诱变筛选的初筛和复筛的方法;经多次离子注入诱变处理,筛选到了高产β-葡聚糖酶菌株SD16,其酶活由原来的73.0U/ml提高到了489.32 U/ml,且该菌株具有很好的遗传稳定性。研究结果表明,N+注入是一种有效的选育高产β-葡聚糖酶菌株的选育方法。最后,试验对黑曲霉高产菌株SD16的液体发酵条件进行了研究,初步确定了高产菌株的发酵条件为:发酵最佳温度为36℃,500ml三角烧瓶中装100ml发酵液,摇床转速为200rpm,接种量为1.5ml(孢子浓度约为106~107个/ml ),发酵培养液的起始PH为6.5,发酵周期为60h。发酵条件优化后,高产菌株酶活进一步提高到512.67 U/ml。
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