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抗球虫药和活疫苗免疫是目前防治鸡球虫病的主要手段,但存在球虫产生耐药性、药物残留以及球虫活疫苗安全性差,免疫效果不理想等问题而得不到广泛应用,因此,研发新型球虫疫苗成为预防鸡球虫病的主要发展方向。本研究克隆E.tenella HB株AMA-1基因与SO7基因分别与IL-2和pPIC9串联,构建免疫调节型真核表达载体GS115-pPIC9-IL-2-AMA-1、GS115-pPIC9-IL-2-SO7并进行蛋白表达,用纯化后的重组蛋白IL-2-AMA-1及IL-2-SO7对鸡进行免疫保护性试验,综合评价其抗球虫效果、免疫原性和抗氧化能力,为以后研制柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗提供理论依据。试验结果如下:1.E.tenella HB株AMA-1基因、SO7基因克隆与鉴定及生物信息学分析结果显示:成功克隆了E.tenella HB株AMA-1基因和SO7基因。其中,AMA-1基因全长为1 617bp,编码535个氨基酸,预测蛋白具有信号肽及跨膜结构;SO7基因全长为645bp,编码215个氨基酸,预测蛋白具有信号肽但无跨膜结构。2.E.tenella HB株免疫调节型真核表达载体GS115-pPIC9-IL-2-AMA-1、GS115-pPIC9-IL-2-SO7构建结果显示:成功将E.tenella HB株AMA-1基因、SO7基因重组到酵母细胞基因组中,构建了免疫调节型真核表达载体。3.重组蛋白IL-2-AMA-1及重组蛋白IL-2-SO7表达与纯化验证结果显示:蛋白具有很好的免疫原性,其中重组蛋白IL-2-AMA-1大小为153kDa,重组蛋白IL-2-SO7大小为89kDa。4.E.tenella HB株重组蛋白IL-2-AMA-1及重组蛋白IL-2-SO7的抗球虫效果、免疫原性和抗氧化能力结果显示:阳性对照组ACI仅为130.68,各免疫组ACI均高于阳性对照组,其中免疫重组蛋白IL-2-SO7效果最高,当免疫剂量达50μg、100μg时,ACI分别为169.44、174.24,抗球虫效果良好。免疫重组蛋白IL-2-AMA-1组和免疫150μg重组蛋白IL-2-SO7组次之。通过体液免疫水平、细胞免疫水平、T-SOD、GSH-Px、T-AOC活性的测定,显示两种重组蛋白具有很好的免疫原性及抗氧化能力,其免疫适宜剂量重组蛋白IL-2-AMA-1为50μg/只,重组蛋白IL-2-SO7为100μg/只。