蛋白质组学的关键技术就是蛋白质纯化。转铁蛋白(transferrin, Tf)是血浆中的一种微量蛋白,在人血浆中的浓度为2.5 g/L左右。Tf具有许多重要的功能,例如抗菌作用、转运铁离子,还可以作为细胞增殖的生长因子,在癌症的治疗领域也有着重要的研究价值。本文以Tf为目标蛋白,建立了一种从Cohn血浆分离法的废弃产物组分IV中纯化Tf的两步层析方法,对得到的Tf产品进行了表征及活性鉴定,并在最优工艺条件下进行了中试放大。首先介绍了蛋白质纯化系统AKTA explorer 100的组成、操作以及工作流程,为后续的蛋白质纯化工作奠定基础。其次研究从Cohn组分IV中纯化Tf的两步层析工艺。组分IV的预处理过程中发现,Tris-HCl缓冲液不利于组分IV的离心,影响后续的过滤,因此选择了将组分IV溶解于超纯水。根据Tf的等电点、疏水性与杂质蛋白的差异,选取了离子交换层析结合疏水层析的纯化方案。比较了离子交换层析过程中的层析介质以及pH两个重要因素的影响效果,发现Capto DEAE层析介质以及pH7.0条件下的分离效果较好,得到的Tf纯度高、收率好、纯化速度快,适合进行初步分离。疏水层析过程中选取了盐浓度作为考察因素,比较了四种不同盐浓度下的分离效果,发现硫酸铵浓度为1.0mol/L时目标蛋白的收率和纯度都取得了不错的效果。然后对Tf样品进行了表征及活性鉴定。通过凝胶过滤高效液相色谱(HPSEC)检测Tf的结构完整性及是否存在聚集体；圆二色光谱鉴定结果表明Tf的二级结构没有发生改变；通过质谱检测其分子量为78726；全波长扫描结果发现在465 nm处有明显的特征吸收峰,表明Tf能结合两个铁离子；抗菌活性测定结果表明Tf对大肠杆菌的生长有明显的抑制作用。最后在最优层析条件下进行了Tf的纯化中试,每批次得到了1g左右的Tf样品。Tf的纯度都达到了99%以上,并且收率较实验阶段有所提高达到了80%以上。本文建立了新型的Tf两步层析纯化工艺,该工艺收率好、纯度高、适合工业放大,同时将废弃组分再利用节约了宝贵的血浆资源；为Tf的功能性研究提供了便利。