大鼠视乳头部位活化的星形胶质细胞与PGE2/EP受体亚型的关系

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目的:探讨视乳头部位星形胶质细胞活化后EP受体的表达特点及对星形胶质细胞的影响。方法:原代培养视乳头星形胶质细胞:取3个月大的SD大鼠的眼球,在手术显微镜下分离出视乳头,将其切成2-3块放在含10%胎牛血清的普通培养基DMEM/F12中培养,待细胞从组织块爬出后去掉组织块,加入星形胶质细胞选择性培养基,然后把分离纯化星形胶质细胞,传代2次用GFAP作细胞鉴定;蛋白印迹法检测C57小鼠、SD大鼠以及正常人视网膜EP受体的表达;细胞免疫荧光分别检测未加药和加表皮生长因子EGF(20ng/ml)、NMDA(50UM)刺激后的星形胶质细胞EP受体的表达定位;采用蛋白印迹法检测EGF(20ng/ml)、NMDA(10、50、100、200um)刺激星形胶质细胞后COX-2、EP受体及GFAP的相对表达情况。结果:经过3周左右的培养,纯化星形胶质细胞大约95%表达GFAP。蛋白印迹结果显示在C57小鼠、SD大鼠以及正常人视网膜EP2-4受体有表达;细胞免疫荧光结果显示,EP1受体表达在细胞胞膜,EP2和EP4受体在胞核表达,EP3在细胞质表达,加药刺激后受体表达定位并没有发生改变;EGF可以使星形胶质细胞活化使其形态发生变化,GFAP表达增加,并有统计学意义(P<0.05);EGF刺激细胞后,蛋白结果显示,COX-2被诱导生成,PGE2的四个受体表达都增加,并且具有统计学意义(P<0.05);NMDA刺激后,EP受体只有轻微表达变化,但没有统计学意义。结论:EGF激活星形胶质细胞使PGE2的EP受体表达增加,参与星形胶质细胞活化反应。
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