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研究目的:
通过体外培养心肌细胞模型，观察氧糖剥夺期亚低温对线粒体结构、呼吸功能的影响，并探讨其保护氧糖恢复后心肌收缩功能的可能机制。
材料和方法:
1、实验分组根据实验目的分为三组：对照组、32℃亚低温氧糖剥夺-37℃氧糖恢复组(低温组)、37℃常温氧糖剥夺-恢复组(常温组)。
2、模型制作
建立体外新生乳鼠原代心肌细胞培养模型，通过Galaxy三气培养箱达到亚低温(32℃)、氧糖剥夺(PaO2=0.1％)和氧糖恢复(PaO2=19.0％)目的。
3、检测指标和方法
在氧糖剥夺前、氧糖恢复后0hr、0.5hr、1hr、1.5hr、2hr观察各组心肌细胞收缩功能变化，计算收缩频率和收缩速率；在复氧0hr、2hr收集细胞送电镜观察细胞超微结构变化，并提取心肌细胞线粒体测定线粒体呼吸控制率。
4、统计学处理
采取SPSS13.0软件包进行统计学分析。实验中数值资料以均数±标准差表示；多组间比较用方差分析，对于不同处理组间的两两比较，主要采用LSD-t检验，相关分析采用二元变量的相关分析,P＜0.05表示差异具有统计学意义。结果
1、培养心肌细胞密度
60mm培养皿细胞数为(3.11±0.07)×106/皿。
2、心肌细胞纯度
培养心肌细胞纯度为(82.64±1.62)％。
3、细胞收缩频率和收缩速率的比较
常温组的收缩速率和收缩频率在氧糖恢复后5个检测时间点均显著低于对照组和低温组(P＜0.05)，低温组收缩频率在氧糖恢复后0hr、0.5hr、1hr低于对照组(P＜0.05)，收缩速率低温组与对照组之间无显著差异(P＞0.05).
4、细胞超微结构改变、损伤积分和线粒体比表面积的比较
常温组在氧糖剥夺后0hr超微结构显示大量线粒体水肿以及肌浆网扩张，氧糖恢复2hr后线粒体和肌浆网损伤有所改善，部分线粒体出现髓鞘样变。0hr时损伤积分(HIS)显著高于对照组、低温组和2hr时点(P＜0.05)。氧糖恢复后0hr、2hr线粒体比表面积均显著低于对照组(P＜0.05)。低温组氧糖剥夺后0hr超微结构损伤程度普遍较常温组减轻，表现为部分线粒体轻微水肿，但与对照组相比仍有统计学差异。氧糖恢复后线粒体趋于正常，损伤积分和比表面积与对照组之间无统计学差异(P＞0.05)。
5、线粒体呼吸控制率的比较
常温组R3、RCR在氧糖剥夺后0hr及氧糖恢复后2hr显著低于对照组(P＜0.05)，R4在0hr较对照组显著增高(P＜0.05)。低温组RCR在0hr低于对照组，具统计学差异，而R3在0hr低于对照组，R4高于对照组，RCR在2hr仍低于对照组，但均无显著差异(P＞0.05)。
6、收缩功能、比表面积与RCR的相关性分析
细胞收缩频率、收缩速率与线粒体RCR呈显著正相关(P＜0.05)，相关系数分别为0.946和0.980；线粒体比表面积与RCR呈显著负相关(P＜0.05)，相关系数为-0.963。
结论:
1、氧糖剥夺期亚低温可以改善氧糖恢复后2hr心肌细胞收缩功能；
2、亚低温可以减轻氧糖剥夺对心肌细胞超微结构，尤其是线粒体的损伤；
3、氧糖剥夺期亚低温可能通过提高氧糖恢复后2hr的线粒体呼吸控制率，来达到改善心肌细胞收缩功能的目的。