论文部分内容阅读
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种猪的急性并高度接触性传染病,以急性肠炎并水样腹泻为特征。我国于1976年首次报道,很多猪群时有发生该病。2010年11月份以来,我国很多省市相继爆发哺乳仔猪腹泻,给养猪业造成了巨大的经济损失。本研究通过PEDV病原学检测、ORF3分子流行病学调查和仔猪人工感染试验,证明其主要病原为PEDV变异毒株,PEDV已成为国内重要的腹泻病毒之一。主要研究内容如下：1.猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测与ORF3基因分子流行病学调查本研究收集自2011年2月至2012年3月,江苏、上海、浙江等省市47个规模猪场共153份腹泻病料样品,并对其进行PEDV抗原RT-PCR检测,结果为：26个猪场的88份样品为PEDV阳性,猪场阳性率达到55.32%,病料阳性率达到57.52%。利用RT-PCR方法将ORF3基因克隆至pMD18-T载体,进行测序分析。结果获得11个流行毒株ORF3全基因序列,其大小为675bp,编码大小为224aa的肽段。11个流行毒株ORF3基因同源性为95.9%-99.9%,编码氨基酸同源性为96.4%-100%。与欧洲代表毒株CV777基因同源性为96.3%-97.0%,编码氨基酸同源性为95.1%-96.4%,与CV777truncated疫苗毒株比较,其基因同源性为96.8%-97.6%,编码氨基酸同源性为92.3%-93.4%,且不存在疫苗毒株ORF3基因的49个碱基缺失现象。与韩国毒株比较,其基因同源性为95.0%-98.5%,编码氨基酸同源性为95.5%-99.6%。基因遗传进化树分析表明,国内外PEDV毒株可分为4群,目前,我国主要流行毒株属于第1群,与韩国毒株亲缘关系较近,而与我国疫苗毒株存在较大差异。研究结果表明,PEDV是目前我国仔猪腹泻的主要病原之一,我国PEDV流行毒株存在明显基因变异。2. PEDV流行毒株仔猪致病性研究根据PEDV ORF3基因测序结果,选择3种不同PEDV流行毒株的仔猪肠毒,分别口服接种3-5日龄健康仔猪,3头／组,5ml/头,生理盐水为对照组。接种后人工哺乳,分笼饲养,观察临床症状、病理变化,并检测病原。结果为：ZJ120101和ZJ120102毒株组可以引起典型的PED症状,包括短时间的呕吐,黄色水样腹泻及严重脱水。ZJ120101组死亡率2/3。剖检发现,肠壁变薄并充满液体。病理切片观察发现,小肠绒毛明显萎缩,上皮细胞脱落,并且肠道皱褶减少。AH110816毒株组仔猪临床症状、眼观病变及组织病变都较为轻微。对照组仔猪未见明显发病症状。PEDV RT-PCR检测结果为,ZJ120101、ZJ120102和AH110816均为阳性,对照组为阴性,PRRSV、 PCV2. TGEV和PoRV PCR检测均为阴性。结果证明,PEDV流行毒株可引起哺乳仔猪发病,但不同PEDV毒株对仔猪致病性有所差异。从而,为该病防治提供理论依据。