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目的: 胰腺癌是恶性程度极高的肿瘤之一,传统的化疗药物无法达到令人满意的临床治疗效果,死亡率与发病率近乎一致,5年生存率仅为5%[1]。因此,研发有效的抗胰腺癌的药物已成为目前胰腺癌治疗研究的热点与重点。青蒿琥酯(ART, artesunate)已在许多研究中被证实具有显著的抗肿瘤活性,有望成为用于临床抗肿瘤治疗的一种新兴药物。 然而,ART抗肿瘤的明确机制尚未被充分证实。本研究旨在通过体外和体内实验探讨ART抑制胰腺癌细胞活性的作用和机制。 方法: 1. 应用MTT比色法检测ART对胰腺癌细胞增殖能力的影响。 2. 应用裸鼠皮下注射胰腺癌PANC-1细胞株悬液法制作胰腺癌异位移植瘤模型。 3. 应用免疫组化检测胰腺癌细胞CD34蛋白的表达水平。 4. 应用RNA-Seq分析检测目的基因的表达。 5. 应用生物信息学,Gene ontology(GO)分析来检测差异表达基因(DEGs)的主要功能,Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)通路分析来分析DEGs的重要通路。 6. 应用PyMOL和SystemsDock等网络药理学网站预测ART与蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A ,PP2A)的结合方式。 7. 应用流式细胞术检测细胞凋亡。 8. 使用Caspase-8和Caspase-9活性检测实验分析ART诱导胰腺癌细胞凋亡的途径。 9. 应用划痕实验检测ART对胰腺癌细胞迁移能力的调控。 10.应用Transwell实验检测ART对胰腺癌细胞侵袭能力的调控。 11.应用免疫荧光检测胰腺癌细胞的Epithelial-Mesenchymal Transition(EMT)。 12.应用丝氨酸/苏氨酸磷酸酶检测实验分析PP2A的活性。 13.应用Real-time PCR检测血管生成基因在胰腺癌细胞中的mRNA表达水平。 结果: 1. ART在体内和体外均可抑制胰腺癌细胞的生长。 2. ART可以抑制胰腺癌细胞的转移。 3. ART可以促进血管生成以及上调血管生成基因的表达。 4. ART通过激活多种激酶途径来上调促血管生成基因。 5. ART可以抑制PP2Ac的表达和活性。 6. ART通过PP2Ac/NF-κB和PP2Ac/JNK依赖性方式来上调促血管生成基因。 结论: ART可以抑制胰腺癌细胞的生长和转移。同时,ART可以抑制PP2Ac的表达和活性并通过PP2Ac/NF-κB和PP2Ac/JNK依赖性途径来上调促血管生成基因的表达并促进肿瘤新生血管生成。这种潜在的副作用可以被贝伐珠单抗(一种临床广泛使用的抗血管生成抗体)阻断,这为临床应用ART治疗胰腺癌提供了新的理论依据。 结果: 1. ART在体内和体外均可抑制胰腺癌细胞的生长。 2. ART可以抑制胰腺癌细胞的转移。 3. ART可以促进血管生成以及上调血管生成基因的表达。 4. ART通过激活多种激酶途径来上调促血管生成基因。 5. ART可以抑制PP2Ac的表达和活性。 6. ART通过PP2Ac/NF-κB和PP2Ac/JNK依赖性方式来上调促血管生成基因。 结论: ART可以抑制胰腺癌细胞的生长和转移。同时,ART可以抑制PP2Ac的表达和活性并通过PP2Ac/NF-κB和PP2Ac/JNK依赖性途径来上调促血管生成基因的表达并促进肿瘤新生血管生成。这种潜在的副作用可以被贝伐珠单抗(一种临床广泛使用的抗血管生成抗体)阻断,这为临床应用ART治疗胰腺癌提供了新的理论依据。