前言 目前在心内直视手术中，心肌保护通常采用灌注改良STThomas心脏停搏液的方法，虽然效果较为满意，但再灌注后常伴有一定程度的心肌缺血再灌注损伤（MIRI），严重者产生低心排综合症及心律失常。围绕心肌保护，各家提出诸多方案，尚无一种十分满意的保护方法。所以很好地防止MIRI是心外科领域有待解决的一项重大课题。流行病学调查发现，雌二醇（E2）能降低绝经后妇女冠心病的发病率。动物实验进一步证实，在心肌缺血前应用E₂，可减轻MIRI。但在心肌缺血期间给予E₂是否对缺血再灌注心肌有保护作用，未见文献报道。本实验将E₂加入改良STThomas心脏停搏液中制成E₂心脏停搏液，利用改良Langendorff离体大鼠心脏灌注装置，复制心肌缺血再灌注模型，在心肌缺血期间灌注E₂心脏停搏液，通过检测冠脉流量（CF）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CPK）以及一氧化氮合酶（NOS）、诱生型NOS（iNOS）和内皮型NOS（eNOS）三种酶活性、mRNA及其蛋白表达等指标，并观察心肌组织及细胞病理形态学改变，来研究E₂心脏停搏液对MIRI的影响，明确该停搏液能否有效地防止MIRI，并探讨其机制。旨在探索出一条新的心肌保护途径。 材料及方法 1．E₂心脏停搏液的制备 将5μmol E₂溶解在1ml二甲基亚砜（DMSO）中，然后加入到1升改良St.ThomasⅡ停搏液[成分（mmol／L）：KCl16，NaCl110，MgCI。16，NaHCO。10，CaCL。1．幻」中，制成 E。心脏停搏液，E。和DMSO在该停搏液最终浓度分别为 5 pmoVL和 0．l％。将配制好的停搏液放人冰箱，保持4℃，待用。 2．卵巢切除（OVX）大鼠模型的制备 成熟雌性 Wistar大鼠，体重 230－260克，由中国医科大学第二附属医院动物部提供。大鼠双侧卵巢被常规切除，成为OVX大鼠饲。该大鼠养二周后，一般状态好，切口及腹腔无感染，体重达280－340克者，用于实验。此时与雌激素受体结合的E。基本消除，而受体数量并无减少，从而消除自身E。对实验的影响。 3．心肌缺血再灌注模型的制备 OVX大鼠腹腔注射10％乌拉坦10讪kg及肝素钠500单位以麻醉和抗凝，15min后迅速剪开胸腔，取出心脏置于4℃的标准Krebs一Henseleit（K一H）液［成分（nuno＊L）：NaCL 118，KCL4．7，CaClzZ．5，MaSO。7H，OI．2，NaHCOa25，KHzPO。1．2，Glucose 11．l二中，主动脉插管后挂在改良uneendoar装置上，用刀℃充氧K－H液（PH 7．4－7．5，PO。450－500mmHg）以 80mmHg灌注压逆行灌注。预灌注15min后以60mmHg压力灌注4℃的心脏停搏液smin，心脏停搏30min (C脏表面温度22℃条件下人然后恢复37℃充氧K—H液灌注30min或60讪n。 4．实验分组 为消除助溶剂DMSO干预实验结果，设立DMSO溶剂对照组。平衡灌注15ban后，48只OVX大鼠随机分为三组，每组16只。空白对照组门一R组＊灌注改良St．Thomas停搏液，心肌缺血30min，分别于再灌30min和60min取标本。溶剂对照组p组入灌注含 0．1％DMSO的改良 St．Thomas 11停搏液，余同 I－R组。雌H醇组K组＊灌注E／心脏停搏液，余同I－R组。 5．观察指标及测定 测量平衡灌注第15min（基础值X再灌注15min乃0min和 ·2·60min时的冠脉流出量＊F人全自动生化检测仪检测冠脉流出液中LDH人PK；硝酸还原酶法检测冠脉流出液中NO；膘吟氧化酶法检测心肌 SOD活性；硫代巴比妥酸法检测心肌 MDA含量；比色法检测心肌细胞iNOS／NOS和NOS活性；免疫组化和原位杂交观测iNOS和eNOS及其mRNA的表达；光、电镜技术观察心肌组织及细胞病理形态学改变。 6．统计学处理 各种数据以k对表示，实验数据输人计算机后，用SPSS 10．0软件进行统计学分析。数据比较用方差分析（One－way ANO－＊A），M D检验。P＜O．05有差异＊＜队01有显著差异。 结 果 心肌缺血再灌注后，民心脏停搏液明显增加0冲＜o．05f＜O．01）和＊0瞩＜0．01人减少冠脉流出液中C＊K和L＊H的产生（P＜0．05，P＜O．01）；上 强心肌细胞叨D活性（P＜0．05，P＜O．01）；减少心肌＊＊A的含量（P＜O．05，P＜O．01）；上强心肌细胞mOS活性（P＜0．0二）和＊OS活性（P＜O．0二），e＊OS活性无明显变化河＞O．05厂增加心肌细胞mOS及其m＊＊A的表达u＜O．05人并且，心肌再灌注60 miniNOS活性及其mRNA和蛋白表达量比再灌注30 Wu明显河＜o．05入而创OS及其m＊＊A的表达无明显变化计＞0．05人上述指标相应时点1－R组与D组相比无差别河＞0．05火光、电镜显示上组心肌组织、细胞和线粒体等损伤较对照组明显减轻。 讨 论 心脏直视手术后，MIRI可引起低心排综合症和心律失常，故 ·3· 一直受到人们的重视，并积极探讨其防治方法与途径。目前临床 上通常采用灌注改良 ST Thomas心脏停搏液的方法来防止 MIRI， 虽然效果较为满