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目的:制备载N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺[N-(4-Hydroxyphenyl)retinamide]脂质微泡(4HPR loaded Lipid microbubbles,4HPR-LM),探讨其联合超声对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Human keloid fibroblasts,HKFs)增殖、凋亡及细胞周期的影响,以及建立裸鼠皮下瘢痕疙瘩种植瘤模型,考察4HPR-LM联合超声对肿瘤生长的抑制作用。方法:通过薄膜-超声分散法制备载4HPR脂质体(4HPR loaded lipsome,4HPR-L),采用高效液相法(High Performance Liquid Chromatograph,HPLC)、动态光散射法(Dynamic Light Scattering,DLS)、透射电镜法(Transmission electron microscope,TEM)对其载药浓度、粒径分布、外观形态、Zeta电位、载药量、包封率及30日内稳定性和渗漏率进行考察。以4HPR-L为前体采用超声空化法制备4HPR-LM。采用细胞增殖抑制试验(CCK-8)法筛选合适超声参数及对空白脂质微泡(Blank-LM)的生物相容性进行评价,并检测游离4HPR、4HPR-L和4HPR-LM联合超声对HKFs的抑制作用;采用细胞划痕实验检测4HPR对HKFs侵袭能力影响;采用流式细胞术检测4HPR对HKFs的细胞周期阻滞作用及诱导细胞凋亡情况。HKFs接种法建立裸鼠皮下瘢痕疙瘩模型,观察4HPR-LM联合超声的体内抑瘤作用,并对其安全性进行评价。结果:4HPR-L制备中探头超声参数为15 min(功率200 W,超声1s,间歇2 s)。(1)制备的4HPR-L载药浓度达1400 μg/ml以上,粒径分布为(100.08±1.33)nm,PDI 为(0.169±0.005),Zeta 电位分布为(-34.27±2.27)mV,透射电镜下显示4HPR-L为外观圆整、大小均匀的球形或类球形结构,直径为l00nm左右;包封率为(95.8±0.2)%,载药量为(8.26±0.35)%。4HPR-L(4°C)密封保存30天其外观、粒径及电位无明显变化,7天、15天、30天渗漏率分别为(2.15±0.27)%,(5.91 ±2.7)%,(8.3±0.7)%。(2)CCK-8 实验表明单纯超声及 Blank-LM对HKFs增殖无明显抑制作用,4HPR、4HPR-L和4HPR-LM联合超声对HKFs抑制作用均有时间和剂量依赖性,且相同浓度下4HPR-LM联合超声抑制作用明显优于4HPR组(P<0.05);(3)细胞划痕实验表明4HPR具有抑制HKFs运动及侵袭作用;(4)流式细胞仪检测结果表明4HPR可有效诱导HKFs发生凋亡并可将细胞阻滞于G2-M期,且所有细胞实验中4HPR-LM联合超声表现出更好作用效果,明显优于游离4HPR。(5)动物实验表明4HPR-LM联合超声有明显的抑瘤作用,治疗结束后瘤重、瘤体积与对照组相有显著差异(P<0.05),实验期间所有裸鼠状态良好,体重无明显变化,各内脏器官HE染色均未见器质性病变。结论:1.制备的4HPR-L稳定性好,药物浓度高,有效改善了 4HPR低水溶性。2.4HPR可抑制HKFs增殖、侵袭能力,并可发挥细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡作用。3.HKFs接种法建立裸鼠皮下瘢痕疙瘩种植瘤模型,4HPR-LM联合超声具有显著的抑瘤作用。4.脂质超声联合微泡可显著提高4HPR作用效果,安全性高,具有广泛的临床应用前景。