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目的结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其转移性是导致患者死亡的主要原因。目前,对结直肠癌的治疗多采用传统的手术切除及放疗和化疗方法,但这些方法副作用大,且肿瘤易复发。随着分子细胞生物学的发展,应用RNAi技术的基因治疗方法为恶性肿瘤的根治带来了新的希望。RNAi技术依靠双链RNA以序列特异性的方式在mRNA层面上阻断相应基因的表达。大量证据表明,ANXA2在人结直肠癌细胞中高表达,且与结直肠癌的侵袭、转移密切相关。本课题应用RNAi技术抑制人结直肠癌细胞(caco2)内ANXA2基因表达,进而探究ANXA2表达对caco2细胞运动有关的微形态和细胞骨架相关蛋白表达及分布的调控,并探讨可能的作用机理。以期为以ANXA2为靶基因对人结直肠癌进行基因治疗积累实验资料。方法1.借助S-TranG转染试剂将靶向ANXA2的干扰重组质粒导入caco2细胞。2.利用扫描电镜在转染后不同时间点观察细胞形态及表面超微结构。3.利用透射电镜在转染后不同时间点观察细胞内部超微结构。4.分别采用直接荧光标记方法、间接免疫荧光方法及免疫细胞化学方法在转染后不同时间点检测细胞内F-actin、β-tubulin及Lamin B的表达及分布并分析Lamin B的平均光密度值。结果1.优化了caco2细胞的转染条件,确定在30mm培养皿中当细胞汇合率为60%-70%、质粒用量为4.5μg、S-TranG用量为10μl以及质粒/S-TranG复合物形成时间为10-15min时可得到80%以上的转染效率。2.扫描电镜观察结果显示：敲低ANXA2后,细胞形态改变,细胞微绒毛及伪足等结构受损,并随时间延长变化加剧。3.透射电镜观察结果显示：敲低ANXA2后,细胞的膜系统受损；线粒体、内质网的数量及分布改变；染色质凝集；且随时间延长变化加剧。4.敲低ANXA2后,细胞骨架系统重塑：呈束的F-actin变细、减少；β-tubulin分布组织性变差；Lamin B表达量减少,平均光密度值下降；且随时间延长变化加剧。结论利用RNAi技术抑制caco2内ANXA2基因的表达可引起细胞运动有关的微结构变化、细胞骨架系统重塑以及细胞恶性表型转变。因此,ANXA2有望成为结直肠癌基因治疗的靶基因。本课题为以ANXA2为靶基因对人结直肠癌进行基因治疗积累了实验资料。