论文部分内容阅读
目的前列腺癌目前在国内外发病率都不断升高,而且中晚期患者居多,失去外科手术治疗机会,冷冻消融是其重要治疗手段之一。冷冻消融治疗前列腺癌后肿瘤细胞在释放肿瘤抗原刺激机体免疫反应的同时,也会释放TGF-β1,TGF-β信号不但能促进肿瘤细胞的迁移,还能招募Treg等抑制性免疫细胞,导致免疫耐受的形成,削弱机体抗肿瘤免疫反应。在冷冻消融治疗前列腺癌的同时,如果采用TGF-β中和性抗体阻断其信号通路,机体TGF-β1会如何变化?Treg细胞会如何变化?两者之间是否具有相关性?针对这些问题,本研究构建小鼠前列腺癌模型,冷冻消融联合TGF-β阻断治疗后检测TGF-β1水平和Treg细胞,分析两者的相关性,探讨TGF-β1对Treg细胞的影响及相关机制。对象与方法1.分别采用划痕试验和Transwell试验检测经TGF-β中和性抗体处理的前列腺癌RM-1细胞迁移和侵袭能力的变化。2.构建前列腺癌小鼠模型,把小鼠随机分为四组,分别设A组为对照组、B组为冷冻组、C组为抗体组、D组为联合组。3.分别于治疗前、治疗后7天和14天采集标本,采用酶联免疫吸附试验检测外周血细胞因子TGF-β1和IL-2水平;采用流式细胞术检测Treg、CD4+T和CD8+T细胞的比例;采用非放射性细胞毒性试验(LDH法)检测脾脏中CTL细胞对前列腺癌RM-1细胞的杀伤活性;采用免疫组织化学染色方法检测小鼠肿瘤组织中Treg、CD4+T、CD8+T细胞的浸润情况及肺转移情况;测量各组小鼠肿瘤直径大小变化。4.分析Treg细胞与TGF-β1水平的相关性,探讨TGF-β1对Treg细胞的影响及相关机制。结果1.划痕试验和Transwell试验结果表明TGF-β中和性抗体降低小鼠前列腺癌RM-1细胞的迁移和侵袭能力,说明TGF-β1参与前列腺癌肿瘤细胞的迁移和侵袭过程。2.A组小鼠外周血TGF-β1水平随着肿瘤生长呈升高趋势,治疗后7天、14天与治疗前比较显著升高,具有统计学差异(P<0.05);与A组比较,B组、C组和D组在治疗后7天、14天TGF-β1水平显著降低,具有统计学差异(P<0.05)。A组小鼠外周血IL-2水平随着肿瘤生长呈降低趋势,治疗后14天与治疗前比较显著降低,具有统计学差异(P<0.05);与A组、B组、C组比较,D组在治疗后7天、14天IL-2水平显著升高,具有统计学差异(P<0.05)。3.A组外周血Treg细胞比例随着肿瘤生长呈升高趋势,治疗后14天与治疗前比较显著升高,具有统计学差异(P<0.05);与A组比较,B组和D组在治疗后14天Treg细胞比例显著降低,具有统计学差异(P<0.05),且外周血Treg细胞与TGF-β1水平呈正相关(P<0.001,R=0.931)。A组脾脏Treg细胞比例随着肿瘤生长呈升高趋势,治疗后14天与治疗前比较显著升高,具有统计学差异(P<0.05);与A组比较,B组和D组在治疗后7天和14天Treg细胞比例显著降低,具有统计学差异(P<0.05),且脾脏Treg细胞与TGF-β1水平呈正相关(P<0.001,R=0.889)。A组肿瘤局部浸润Treg细胞随着肿瘤生长呈增加趋势,治疗后14天与治疗前比较显著增加,具有统计学差异(P<0.05);与A对相比,B组和D组在治疗后14天Treg细胞比例显著减少,具有统计学差异(P<0.05),且肿瘤局部浸润Treg细胞与TGF-β1水平呈正相关(P<0.001,R=0.912)。4.A组脾脏CD4+T和CD8+T细胞比例随着肿瘤生长呈下降趋势,治疗后14天与治疗前比较显著降低,具有统计学差异(P<0.05);与A组、B组及C组比较,D组在治疗后7天、14天CD4+T和CD8+T细胞比例显著增加,具有统计学差异(P<0.05),且脾脏CD4+T和CD8+T细胞与TGF-β1水平呈负相关(P<0.001,R=-0.813;P<0.001,R=-0.839)。A组肿瘤局部浸润CD4+T和CD8+T细胞随肿瘤生长呈减少趋势,治疗后14天与治疗前比较显著减少,具有统计学差异(P<0.05);与A组、B组、C组比较,D组在治疗后14天CD4+T和CD8+T细胞比例显著增加,具有统计学差异(P<0.05),且肿瘤局部浸润CD4+T和CD8+T细胞与TGF-β1水平呈负相关(P<0.001,R=-0.852;P<0.001,R=-0.914)5.A组脾脏CTL细胞对RM-1细胞的杀伤活性随着肿瘤生长而呈下降趋势,治疗后14天与治疗前比较显著降低,具有统计学差异(P<0.001);与A组、B组及C组比较,D组在治疗后7天、14天CTL细胞杀伤活性显著增加(P<0.001),且脾脏CTL细胞的杀伤活性与TGF-β1水平呈负相关(效靶比为10:1时P<0.001,R=-0.866;效靶比为20:1时P<0.001,R=-0.875)。6.A组小鼠肺转移率随疾病进展呈逐渐升高趋势,与A组、B组和C组比较,D组在治疗后14天显著降低,具有统计学差异(P<0.05);A组小鼠肿瘤直径随着疾病进展逐渐增大,与A组比较,B组、C组和D组治疗后7天、14天显著减小,具有统计学差异(P<0.05)。结论TGF-β1参与小鼠前列腺癌RM-1细胞的迁移和侵袭过程,TGF-β中和性抗体降低RM-1细胞的迁移和侵袭能力;随着疾病的进展,前列腺癌小鼠外周血TGF-β1水平升高,IL-2水平降低,Treg细胞增加,CD4+T和CD8+T细胞减少,脾脏CTL细胞杀伤活性降低,其中,Treg细胞与TGF-β1呈显著正相关,CD4+T和CD8+T细胞与TGF-β1呈显著负相关,脾脏CTL细胞杀伤活性与TGF-β1呈显著负相关;冷冻消融联合TGF-β阻断治疗后,小鼠外周血TGF-β1水平降低,IL-2水平升高,Treg细胞减少,CD4+T和CD8+T细胞增加,脾脏CTL细胞杀伤活性增加,肺转移减少,肿瘤生长减缓。