鸡源致病性菌药敏试验及药敏试剂盒的研制

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论文以广东省21个地级市为单位,从鸡场病死鸡进行采集、分离细菌,并用30日龄鸡进行致病性试验,经鉴定和纯化获得鸡源致病性大肠杆菌182株和沙门氏杆菌33株。参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)所推荐的纸片扩散方法(即Kirby-Bauer的菌液涂布法)对182株鸡源致病性大肠杆菌和33株沙门氏杆菌进行体外28种药物药敏试验。研究结果表明182株鸡源致病性大肠杆菌对以下药物敏感率较高:氨曲南敏感率97.8%、奈替米星敏感率84.6%、头孢氨苄敏感率76.4%、阿米卡星敏感率76.9%、妥布霉素敏感率77.5%、多粘菌素B敏感率93.4%、氟苯尼考敏感率60.5%、庆大霉素敏感率59.3%;对以下药物耐药率较高:氨苄西林耐药率94.0%、链霉素耐药率91.2%、强力霉素耐药率98.4%、罗红霉素耐药率95.6%、氟罗沙星耐药率93.4%、恩诺沙星耐药率91.8%、林可霉素耐药率97.8%、克林霉素耐药率97.8%、复方磺胺耐药率91.8%、利福平耐药率99.5%。33株鸡源致病性沙门氏杆菌对以下药物敏感率较高:氨曲南敏感率90.9%、妥布霉素敏感率81.8%,阿米卡星敏感率63.6%、氟苯尼考敏感率75.0%、头孢氨苄敏感率54.5%、卡那霉素敏感率54.5%、庆大霉素敏感率54.5%;对以下药物耐药率较高:链霉素耐药率63.6%、强力霉素耐药率100.0%、二甲胺四环素耐药率63.6%、罗红霉素耐药率100.0%、氟罗沙星耐药率72.7%、恩诺沙星耐药率72.7%、林可霉素耐药率100.0%、克林霉素耐药率100.0%、复方磺胺耐药率90.9%、利福平耐药率100.0%。 试验结果表明分离菌株都为多重耐药菌株,在182株鸡源性大肠杆菌分离株中,最少是耐8种药物的分离菌株,最高的可达25耐。在33株鸡源性沙门氏杆菌分离株中,最少是耐9种药物的分离菌株,最高的可达22耐。 传统的试管稀释法和纸片扩散法两种药敏试验不方便在养殖场使用,本课题根据细菌在繁殖过程能够利用培养基中某种糖,将其分解为更小分子并产酸,培养基的pH值由中性变为酸性,在指示剂的作用下培养基发生明显的颜色变化的原理,开展药敏试剂盒的研制。通过实验,我们筛选出酚红指示剂,其颜色变化明显,且所需时间最短,为4小时。通过大量实验,我们筛选出药敏试剂盒最佳配方:普通肉汤培养基+葡萄糖+酚红+药物。参考药敏纸片试验的结果及药物分类代表,选择氨苄西林、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、头孢氨苄、氟苯尼考、大观霉素十种兽医临床使用的抗菌药物(各种药物在培养基中的浓度参考NCCLS标准设定),对临床分离的32株致病菌进行试管药敏显色试验,试管法与纸片药敏法的符合率为93.4%。采用琼脂打孔法测定药物在培养基中的稳定性,除氨苄西林不稳定外,其余药物在培养基中均稳定。从大量的试验数据可看出,药敏试制盒的组方和工艺是科学可行的。
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