论文部分内容阅读
目的:研究运动疲劳状态下骨骼肌线粒体中PHB1与F0F1-ATP合酶是否存在相互作用,以及与其具体产生作用的亚单位。方法:选取雄性SD大鼠80只（8周龄）,先适应性喂养2天,称重后随机分为两个运动程序进行动物跑台运动实验:1.急性运动训练程序（1）对照组:20只,常规饲养,不加干涉;（2）急性力竭组:20只,常规饲养,满8周后让大鼠一次性力竭活动;判别力竭状况的标准为:大鼠的跑姿由蹬地式转变为伏地式,滞留在跑道尾部不再连续跑动,且电刺激也不能驱使大鼠再继续跑动。2.长期运动训练程序:（1）对照组:20只,常规饲养,不加干涉。（2）中等强度训练组:20只,每周6天,第一周以坡度为10%,10m/min的速率跑10min;第二周以坡度为10%,15m/min的速度跑10min每天增加10min之第二周结束为止,从第三周开始维持这速度和时间跑到第8周完为止;（3）过度疲劳训练组:20只,每周练习6天,歇息1天,采取强度递增式跑台活动。从练习的第1周起,逐步增添速率、坡度和跑步时长。跑台的速率从15m/min,每周增添5m/min,增至30m/min,后再也不增添;坡度从0°起,每周增添5°,增添至15°后再也不增添;训练时间从30min,每周增加20min增加到110min后稳定训练时间,不再增加。训练周数直至第8周。收集各组模型动物的骨骼肌组织样品,一部分留样,一部分用研磨管进行组织匀浆,匀浆组织用线粒体蛋白试剂盒提取线粒体蛋白,质谱鉴定分析出与PHB1相互作用的ATP合酶亚单位。然后采取免疫共沉淀方式验证不同运动形式大鼠线粒体ATP合酶中与PHB1相互作用的亚单位。结果:1.质谱分析检测出了ATP合酶亚单位,四组不同运动形式的大鼠骨骼肌线粒体中都含有的与PHB1结合的ATP合酶蛋白:ATP合酶α亚单位和ATP合酶亚单位γ。其中以过度训练组ATP合酶蛋白种类最多,对照组ATP合酶蛋白种类最少。与对照组相比,中等训练组大鼠又检测出ATP合酶亚单位d;过度训练组大鼠又检测出ATP合酶F0复合体亚单位B1、ATP合酶亚单位d、ATP合酶亚单位O、ATP合酶亚单位β。与中等强度训练组相比,过度训练组又多检测出ATP合酶F0复合体亚单位B1、ATP合酶亚单位β、ATP合酶亚单位O。与对照组相比,一次性力竭组又多检测出ATP合酶亚单位β。2.免疫共沉淀发现PHB1与ATP合酶的α、γ亚单位相互作用。结论:1.骨骼肌线粒体中PHB1与ATP合酶存在相互作用。2.大鼠骨骼肌线粒体中PHB1与ATP合酶的α、γ亚单位存在相互作用。