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大口黑鲈(Micropterus salmoides)原产于北美密西西比河流域,自上世纪八十年代引入我国大陆后,因其生长快,肉质鲜美,已成为我国淡水养殖的重要品种。其中广东为全国的主养地区,年产量占国内总产量的60%以上。2006~2008年的高水温期,广东省佛山市内的养殖鱼塘先后暴发了大口黑鲈溃疡综合征,使用消毒药和抗菌药物进行治疗,均无效。该病发病急、死亡率高,给养殖造成了巨大的经济损失,已对大口黑鲈养殖产业构成了严重威胁。为了查明发病原因及其防治方法,在疾病调查的基础上开展了大口黑鲈溃疡综合征病原的分离、鉴定及其细胞灭活疫苗免疫效果的分析研究。 调查发现患病大口黑鲈的主要症状为:病鱼体表大片溃烂,裸露肌肉坏死并有出血,尾鳍、胸鳍和背鳍基部红肿溃烂等症状。部分病鱼体表体色变黑,眼有白内障,或伴有心腔血块聚积,鳃动脉扩张淤血,鳃丝和肝脏发白;少数病鱼螺旋游动,肝、脾、肾肿大并伴有出血。从病灶处进行细菌分离和回归感染健康大口黑鲈,却不能复制出与自然发病鱼相同的症状,而用患病鱼病灶肌肉组织制成的除菌组织病毒滤液回归感染健康大口黑鲈,7 d后出现典型的溃疡综合征症状;取患病鱼病灶肌肉组织制作超薄切片,经电镜观察,发现有大量的病毒颗粒,病毒粒子有囊膜,呈六角形,正二十面体对称,大小约为145.5 nm;根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白(major capsidprotein,MCP)基因序列设计特异引物,提取人工感染发病鱼病灶肌肉组织DNA进行PCR扩增,将扩增片段进行核苷酸和氨基酸序列测定与分析,结果表明,该序列与已报道的虹彩病毒MCP基因有着较高同源性。从MCP基因测序分析结果确认该病毒为虹彩病毒科蛙病毒属中的一种病毒,我们将此病毒暂命名为大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV),将由此病毒引起的溃疡病暂定名为大口黑鲈病毒性溃疡综合征(Largemouth bass ulcerative syndrome,LBUS),有关LBUSV的病例在国内尚属首次报道。 取自然发病鱼和人工感染发病鱼的鳃、皮肤、肌肉、肝、脾、肾等组织进行光镜组织切片和超薄切片病理组织学分析,结果表明:光镜组织切片均发现各组织有不同程度的病变,从超薄切片中发现有大量的病毒颗粒。确定该病原作用的位点及靶器官主要在脾脏,为临床防治该病提供有价值的研究资料。 在本实验室中制备LBUS细胞灭活疫苗。采用甲醛保温处理,在不同的灭活时间上进行取样检测,经过一系列的实验比对,得出35℃时彻底火活需要72 h;并用油乳剂佐剂与蜂胶佐剂以及3个不同浓度的疫苗进行免疫效果的对比,结果表明:蜂胶佐剂的高浓度疫苗免疫效果可达55%,对大口黑鲈有一定的免疫保护作用。