一种吡唑并嘧啶衍生物对黄瓜枯萎病的诱导抗病表达及抗病机理初探

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通过筛选获得两种具有我国自主知识产权的新化合物:吡唑并嘧啶衍生物(简称BDO-1)和哒嗪酮衍生物(简称PDZ-1),经过对这两种化合物广谱诱导抗病性的研究发现其对7种蔬菜病害均有诱导抗病效果。尤其BDO-1在抗黄瓜枯萎病上的效果较好。本论文综合了激光扫描共聚焦显微镜技术、Real-time PCR技术及蛋白组学对BDO-1使黄瓜抗枯萎病的机理进行了研究。主要结果如下:1.BDO-1、PDZ-1对蔬菜病害的广谱诱导抗病性及诱导抗病技术的研究。通过叶面喷雾诱导后,BDO-1对黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、黄瓜枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、黄瓜霜霉病(Pseudoperospora cubensi)诱导抗病效果比较突出,诱导抗病效果在48.8278.5%之间;PDZ-1对黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、黄瓜多主棒孢叶斑病(Corynespora cassiicola)、黄瓜霜霉病(Pseudoperospora cubensi)诱导抗病效果比较好,诱导抗病效果在35.6563.81%之间,且发现诱导抗病效果并不会随着化合物浓度的升高而增大。对BDO-1、PDZ-1的离体生物活性研究发现,这两种化合物对尖孢镰孢菌及多主棒孢叶斑病菌的生长均没有明显的抑制作用,说明其不具有杀菌活性。筛选出BDO-1、PDZ-1的最适诱导条件为:浓度10 mg/L下诱导间隔期为5 d,诱导次数为5次。2.对BDO-1使黄瓜对尖孢镰孢菌产生系统获得抗性进行研究。BDO-1诱导黄瓜后接种尖孢镰孢菌1 d,会使植株H2O2的含量升高,随后引起黄瓜根部胼胝质的积累,且SOD酶和CAT酶的活性在接种后3 d均有所提高。激光共聚焦显微技术观察发现BDO-1诱导黄瓜叶片后接种7 d,尖孢镰孢菌在根部侵染速度减慢。Real-time PCR技术检测发现,BDO-1诱导黄瓜后,防卫基因CAT、PAL、LOX、EIN2在接种后表达量逐渐升高至第7 d达到峰值;PR1和SOD在接种后1 d时表达量最高,之后逐渐降低。3.通过蛋白质组学研究,初步明确了水杨酸通路是BDO-1诱导黄瓜对枯萎病菌产生系统获得抗性的主要通路。通过label-free结合质谱的方法对BDO-1诱导后的黄瓜差异表达蛋白进行研究。一共鉴定到3685个差异表达蛋白,表明BDO-1会激活黄瓜大规模的防御反应。黄瓜中与抗病相关的蛋白如结构分子活性蛋白、抗氧化活性蛋白及信号传导等相关的蛋白的表达量均受到BDO-1的影响而上调表达,从而抵御尖孢镰孢菌的侵染。进一步运用KEGG结合生物信息分析,构建了BDO-1诱导黄瓜对枯萎病菌产生系统获得抗性的蛋白通路图。抗病过程中,活性氧爆发、MAPK通路、钙离子信号通路、过敏性反应及水杨酸通路代谢等均受到BDO-1的影响,最终使黄瓜系统抗病性增强。并在蛋白质水平初步明确了BDO-1作用于黄瓜后的信号通路为:水杨酸通路起主要作用,茉莉酸/乙烯通路起辅助作用。
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