背景与目的：结直肠癌(colorectal cancinoma，CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一，也是全球因癌症引起死亡的主要原因之一。在我国，结直肠癌的发病率和死亡率都呈现上升趋势，尤其在大城市，结直肠癌已经跃升到恶性肿瘤发病原因的第3位。Eph(erythropoietin-producing human hepato-cell carcinoma cell line，Eph)是酪氨酸激酶受体家族(receptor tyrosine kinases，RTK)中最大的一个亚群，分为A和B两个亚家族，包括16种Eph基因的受体和9种配体。关于Eph的研究表明其在肿瘤中呈现不同的表达状况，在肿瘤演进过程中发挥肿瘤抑制或者肿瘤促进的作用。本论文利用实时定量逆转录酶多聚酶链式反应(quantitative real-time reversetranscriptase-polymerase chain reaction，quantitative real-time RT-PCR)、甲基化特异性多聚酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction，MSP)和免疫组织化学方法(immunohistochemistry，IHC)，研究EphB1在结直肠癌中的表达状况及其可能机制，对结直肠癌的治疗具有重要的理论和临床意义。　　 方法：　　 提取5株结肠癌细胞系和78例结直肠癌组织中的总RNA和DNA，利用实时定量RT-PCR方法检测EphB1 mRNA表达变化，分析表达变化和临床病理特征之间的关系；使用甲基化特异性PCR检测EphB1 DNA启动子区域5端CpG岛甲基化状况；应用免疫组织化学技术EnVision法对结直肠癌中EphB1、EphrinB1及β-连环蛋白(β-catenin，β-cat)表达变化和临床病理特征与预后之间的关系进行分析。　　 结果：　　 (1)5株结肠癌细胞系中EphB1基因表达有差异，其中HT29细胞系表达最低，SW480细胞系表达最高。78例结直肠癌患者EphB1 mRNA表达变化表现出不一致性，即27例表达下调(34.6％)，36例表达上调(46.2％)和15例表达没有变化(19.2％)。统计学分析显示，EphB1 mRNA在结直肠癌中的表达变化与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、临床TNM分期、浸润深度以及淋巴结转移等临床病理参数无相关性；下调表达与结直肠癌患者肿瘤的病理分化有关(P=0.037，差别有显著意义)，在低分化腺癌和粘液腺癌的患者中EphB1 mRNA的表达显著下调。　　 (2)5株结肠癌细胞系和27例EphB1表达下调结直肠癌患者EphB1 DNA启动子区域5端CpG岛没有发现甲基化现象。　　 (3)EphB1蛋白质在结直肠癌中的表达变化也是不一致的，69例患者中39例表达下调(56.6％)，15例表达上调(21.7％)，15例表达没有变化(21.7％)。统计学分析显示，EphB1蛋白质下调表达与结直肠癌患者肿瘤的病理分化(P=0.043)、肿瘤的浸润深度(P=0.020)以及性别(P=0.019)有关，差别有显著意义；而与结直肠癌患者年龄、肿瘤部位、临床TNM分期和淋巴结转移等临床病理参与无相关性。但是，EphB1 mRNA和EphB1蛋白质之间表达没有相关性，这可能存在转录后翻译过程的改变。　　 (4)EphrinB1蛋白质在结直肠癌中的表达变化以下调为主，105例患者中78例表达下调(74.3％)，19例表达上调(18.1％)，8例表达没有变化(7.6％)。统计学分析显示，EphrinB1蛋白质下调表达与结直肠癌患者肿瘤的浸润深度(P=0.015)有关，差别有显著意义；而与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤病理分化、临床TNM分期和淋巴结转移等临床病理参数无相关性。　　 (5)EphB1蛋白质和EphrinB1蛋白质在结直肠癌中的表达变化情况虽然不是完全相同，采用Correlate相关分析发现EphB1蛋白质和EphrinB1蛋白质表达呈现正相关，相关系数0.546(P<0.001)。　　 (6)β-cat发生异常细胞核表达时，EphB1阳性表达21/105(20.0％)，阴性表达51/105(48.6％)；EphrinB1阳性表达22/105(21.0％)，阴性表达52/105(49.5％)。β-cat细胞膜阳性表达时，EphB1阳性表达22/105(21.0％)，阴性表达11/105(10.5％)；EphrinB1阳性表达20/105(19.0％)，阴性表达11/105(10.5％)。在β-cat发生异位表达时，EphB1和EphrinB1表达都表现以下调为主。使用Correlate相关分析发现EphB1和EphrinB1表达和β-cat异位表达呈现负相关，相关系数分别-0.354(P<0.001)和-0.285(P=0.003)。　　 (7)随访83例，经Kaplan-Meier行生存分析，EphB1下调表达患者的预后差(P=0.016)EphrinB1表达变化对患者的生存率无显著影响(P=0.084)，EphrinB1表达变化对患者的预后影响没有统计学意义。此外，在17例因为结直肠癌的远处转移而死亡患者中，14例EphB1表达下调，15例EphrinB1表达下调。　　 结论：　　 (1)EphB1在结肠癌细胞系中有表达，只是表达水平不同。　　 (2)EphB1在结直肠癌中的表达存在差异，在低分化腺癌和粘液腺癌中表达明显下调，说明EphB1表达变化和结直肠癌的发生和演进有一定关系。　　 (3)甲基化特异性PCR检测结果说EphB1基因在结直肠癌中的表达下调不是由于启动子区域的5’端CpG岛甲基化引起，有可能EphB1基因的下调表达是由于基因突变、微卫星不稳定性和染色体的易位导致，为进一步对于EphB1的表达异常研究提供基础。　　 (4)EphB1蛋白质在低分化腺癌和粘液腺癌、更深的浸润深度以及男性患者中明显下调，进一步说明EphB1可能在结直肠癌的发生和进展中发挥肿瘤抑制作用。　　 (5)EphrinB1蛋白质的下调表达和浸润深度之间差异有统计学意义，肿瘤浸润越深，EphrinB1的表达下调越多。而且，EphB1蛋白质和EphrinB1蛋白质表达之间存在正相关性。说明EphrinB1作为EphB1的配体，在结直肠癌发生和发展过程中可能和EphB1相互作用发挥肿瘤抑制作用。　　 (6)β-cat发生异常核表达时，EphB1和EphrinB1的表达明显缺失，这说明EphB1和EphrinB1在结直肠癌的发展过程中发挥肿瘤抑制作用，抑制结直肠癌的转移。　　 (7)EphB1下调表达的患者预后要差于EphB1上调表达的患者，EphrinB1的下调表达对患者的预后影响没有统计学意义。EphB1表达变化可以作为预后因素之一。而且，EphB1和EphrinB1在因为转移而死亡的患者当中显著下调，说明EphB1和EphrinB1抑制结直肠癌的血道转移。