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本文从以下几个部分展开论述： 第一部分 急性缺血性脑卒中后血管紧张素转换酶水平变化及其机制研究 目的:研究急性缺血性脑卒中后ACE水平变化及其调控机制. 方法:本实验使用AIS患者和自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)永久性大脑中动脉栓塞(Permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)动物模型作为研究对象,(1)研究不同脑梗死面积的AIS患者血清中ACE的活性水平:入院后收集患者的基线资料并立即行多模磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检查,通过磁共振血管成像(magnetic resonance angiography,MRA)检查明确是大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)主干阻塞抑或是其远段分支阻塞,据此将患者分为大面积脑梗死组(n=60,MCA主干阻塞)和小面积脑梗死组(n=72,MCA远段分支阻塞),对照组纳入的是在神经内科门诊就诊的既往无脑卒中史且MRI检查正常的患者(n=110);梗死面积通过磁共振弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检测计算;此外,分别在起病后24h内、3d、7d、21d四个时间节点抽取静脉血留待检测血清中ACE水平,采用分光光度法(spectrophotometry)测定患者血清中ACE活性;同时,在入院时对患者进行National Institute of Health Stroke Scale(NIHSS)评分;(2)研究不同脑梗死面积的SHR对血清中ACE活性水平及神经行为评分的影响:将所有大鼠随机分为假实验组、脑梗死组、脑梗死+U-0126组、脑梗死+氯沙坦组、脑梗死+PD123319组(每组6只大鼠,n=6),各组大鼠从实验开始前2周每日给予胃管注入氨氯地平(10mg/kg/d)降血压,动态监测大鼠血压,脑梗死+U-0126组、脑梗死+氯沙坦组、脑梗死+PD123319组每只大鼠从实验开始前1周分别接受U-0126(30mg/kg/d,腹腔注射)、氯沙坦(50mg/d,胃管注入)、PD123319(50mg/d,胃管注入)处理.自发性高血压大鼠pMCAO动物模型造模成功后,在缺血24h节点对各组进行神经功能缺损评分,并抽取尾静脉血,采用分光光度法测定各组血清ACE活性,取脑后2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC)染色测定大鼠脑梗死面积.由于每只大鼠对缺血的耐受程度以及侧支循环状况不同,根据测得的梗死面积的不同将脑梗死组进一步划分为小面积脑梗死组(梗死面积<1/2MCA支配区域)和大面积脑梗死组(梗死面积≥1/2MCA支配区域),并将脑梗死组测得的血清ACE水平分别计入小面积脑梗死组和大面积脑梗死组;(3)研究脑梗死后梗死周边区域ACE水平变化及其机制:采用实时定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)及免疫组化(Immunohistochemistry)测定各组梗死周边区域ACE表达水平;采用WB测定各组梗死周边区域p-NF-κB p65、NF-κB p65、p-IκB-α、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达量;利用ERK1/2拮抗剂U-0126抑制ERK1/2的活性,观察ERK1/2失活后各组梗死面积、神经功能缺损评分以及梗死周边区域ACE、p-NF-κB p65、NF-κB p65、p-IκB-α表达量的变化;(4)研究哪一种AngⅡ受体介导了ACE的上述表达变化及调控过程:使用AT1受体拮抗剂氯沙坦和AT2受体拮抗剂PD123319分别干预上述调控ACE水平的信号通路,观察AT1R和AT2R被阻断后,各组梗死面积、神经功能缺损评分以及梗死周边区域ACE水平的变化. 结果:(1)与对照组相比,大面积脑梗死组和小面积梗死组患者血清ACE活性水平在梗死后24h均已升高(大面积梗死组升高更为明显),梗死3d后达到顶峰(大面积脑梗死组峰值明显更高),梗死7d后水平均逐渐下降,直至梗死21d后降至对照组水平;同时,入院时的NIHSS评分与血清中增高的ACE活性水平密切相关;(2)首先,各组之间测得的血压无明显差异;与假手术组相比,脑梗死组大鼠缺血24h后血清ACE活性水平明显升高,梗死脑组织周边区域ACE表达水平显著增高.此外,该区域的p-NF-κB p65、p-IκB-α、p-ERK1/2蛋白表达量在脑梗死组明显增加,而NF-κB p65、ERK1/2表达量没有明显变化.进一步的亚组分析显示,与小面积脑梗死组相比,大面积脑梗死组的血清ACE活性明显增加;(3)与脑梗死组相比,使用U-0126能明显降低梗死周边区域p-NF-κB p65、p-IκB-α的蛋白表达量以及ACE水平,同时明显减少梗死面积和神经功能缺损评分,但是NF-κB p65的蛋白表达量未见明显改变;(4)与脑梗死组相比,使用AT1受体拮抗剂氯沙坦可以显著降低梗死周边区域ACE水平,同时明显减少梗死面积和神经功能缺损评分;而AT2受体拮抗剂PD123319对此并无显著影响. 结论:(1)AIS患者血清ACE活性水平显著增高,且与梗死面积呈正相关;(2)自发性高血压大鼠pMCAO动物模型造模成功后其梗死周边区域ACE表达水平变化是通过ERK/NF-κB通路调控的;(3)AT1受体而非AT2受体介导ACE的上述表达变化及调控过程. 第二部分 大动脉粥样硬化型缺血性脑卒中后脑微出血危险因素分析 本课题的完成能在一定程度上明确LAA亚型缺血性脑卒中后诱发CMBs的危险因素,指导临床医生进一步完善诊疗方案,从而最终能改善缺血性脑卒中患者的预后. 目的:评估急性缺血性脑卒中后诱发脑微出血的危险因素. 方法:本实验纳入112例LAA亚型AIS患者(排除高血压病史)为研究对象,研究AIS后诱发CMBs的危险因素:入院后采集患者病史、进行体格检查、收集基线资料(包括年龄、性别、卒中危险因素、发病前用药等),同时需行多模磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检查,依次获得T1加权序列、T2加权序列、T2-FLAIR序列、DWI序列以及SWI序列影像,通过SWI序列成像结果,将AIS患者分为有CMBs组(n=56)和无CMBs组(n=56),⑴评估两组患者以下因素如性别、糖尿病、吸烟、酗酒、使用他汀药物、使用阿司匹林、使用氯吡格雷、蛋白尿、深部脑白质高信号(DWMH)以及脑室旁白质高信号(PVH)等对CMBs的发生有无影响;⑵评估两组患者年龄、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白-a、尿酸、尿素氮、肌酐、同型半胱氨酸等因素对CMBs的发生有无影响;⑶根据CMBs病灶位置将其分为:脑叶型、脑深部型以及混合型,研究血清中同型半胱氨酸水平是否与CMBs的病灶位置有关;⑷根据CMBs病灶数量,将CMBs分为轻度、中度、重度三个组别,研究三个组别间血清中同型半胱氨酸水平是否有差异. 结果:(1)在纳入的所有LAA型AIS患者中,CMBs的发生率为50%,并且与无CMBs组相比,有CMBs组的DWMH和PVH的Fazekass分级明显更高,具有统计学意义,而性别、糖尿病、吸烟、酗酒、使用他汀药物、使用阿司匹林、使用氯吡格雷、蛋白尿等因素两组间并无显著差异;(2)与无CMBs组相比,有CMBs组的年龄以及血清中尿酸、肌酐和同型半胱氨酸水平显著增加,在单因素logistic回归分析中具有统计学差异,而经过多因素logistic回归分析后显示相对较高的年龄和血清同型半胱氨酸水平在两组间具有显著统计学差异,其他如糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白-a、尿素氮等因素在两组间并无显著差异;⑶血清中同型半胱氨酸水平在脑叶型CMBs、脑深部型CMBs以及混合型CMBs三组间未见显著差别,无统计学意义;⑷血清中同型半胱氨酸水平在轻度CMBs、中度CMBs、重度CMBs三组间有显著差异,具有统计学意义. 结论:(1)高龄和血清中同型半胱氨酸水平较高的LAA亚型AIS患者(排除高血压病史),罹患CMBs的概率明显增加,即血清同型半胱氨酸水平或可作为预测LAA亚型AIS患者发生CMBs的独立危险因素;(2)血清中同型半胱氨酸水平与CMBs的严重程度呈正相关.