【摘 要】
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藏药翁布为柽柳科（Tamaricaceae）水柏枝属（Myricaria）植物水柏枝（Myricaria paniculata auct.non Linn.Desv）,其主要治疗瘟病时疫、脏腑毒热、咽喉肿痛、黄水病等症。课题组前期从翁布中得到24种化合物和精油,并进行了生物活性分析,表明翁布化合物及精油有良好的抑菌、抗炎、解热镇痛的药理活性;对翁布化合物及精油对于紫外线照射导致皮肤衰老损伤的研究少
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藏药翁布为柽柳科（Tamaricaceae）水柏枝属（Myricaria）植物水柏枝（Myricaria paniculata auct.non Linn.Desv）,其主要治疗瘟病时疫、脏腑毒热、咽喉肿痛、黄水病等症。课题组前期从翁布中得到24种化合物和精油,并进行了生物活性分析,表明翁布化合物及精油有良好的抑菌、抗炎、解热镇痛的药理活性;对翁布化合物及精油对于紫外线照射导致皮肤衰老损伤的研究少见报道。本文以前期工作为基础,探究筛选得到的7种活性成分及精油对紫外线UVB所致HaCat细胞损伤的保护作用,主要研究结果如下:1、建立紫外UVB照射HaCat细胞模型,8 m J/cm~2UVB照射5、10、15、20 min后,CCK-8测定细胞存活率,结果表明照射20 min时细胞存活率降至50%以下,照射10 min细胞的存活率为83%,因此后续实验选用UVB照射10 min,照射总剂量为24 J/cm~2建立UVB细胞模型。2、采用CCK-8法测定不同浓度的7种化合物和精油对HaCat细胞作用不同时间,从而对HaCat细胞活力的影响,化合物组分别用3、5、10μmol/L作用4、6、8 h,结果表明不同浓度作用4 h,除化合物1和化合物7,其余化合物均在3μmol/L时细胞活力最大。6 h和8 h作用时间下浓度为3μmol/L时细胞活力最大均超过100%,10μmol/L及以上对细胞有抑制作用,表明高浓度的化合物没有进一步地增强细胞活力;在相同浓度不同时间下,化合物作用6 h细胞活力达最大,翁布精油组选取浓度0.01、0.1、0.5、1%v/v分别作用4、6、8、10 h,结果表明精油浓度为0.01、0.1、0.5%v/v,细胞活力呈上升趋势,作用8 h达到最大值。因此后续实验化合物组选用3μmol/L作用6 h,精油组选用0.01、0.1、0.5%v/v作用8 h。3、利用UVB照射HaCat细胞模型,在照射前使用化合物和精油做用于HaCat细胞,之后进行照射,培养24 h后进行SOD、MDA、ROS及相关炎症因子TNF-α、IL-6蛋白的含量和凋亡蛋白Caspase-3含量指标测定。结果表明翁布7种化合物和翁布精油处理组与模型组均达到显著差异（P＜0.05）,表明翁布7种化合物和翁布精油可以改善HaCat细胞被UVB照射引起的细胞形态的改变,维持细胞活力,还可以降低细胞内ROS和MDA含量、提高细胞内SOD活力和有效降低IL-6、TNF-α炎症因子和Caspase-3蛋白的含量,各处理组与模型组、模型组和正常组均达到了极显著水平（P＜0.01）,说明化合物和精油具有良好的抗炎功效,对Caspase-3蛋白可以有效抑制,发挥抗光老化的作用。4、对翁布7种化合物和精油中10种活性成分进行网络药理学和分子对接分析,对翁布化合物和精油抑制UVB照射HaCat细胞引起的凋亡损伤的作用机理进行了预测。通过构建“药物成分-靶点-通路”图,筛选得到9种化合物,53个靶标,20条通路,进一步对治疗皮肤炎症疾病机制研究提供参考。又通过分子对接得到的5种有效活性成分和4种关键蛋白进行验证,表明了翁布化合物和翁布精油活性成分通过调控关键靶点发挥改善皮肤炎症的作用。
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