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目的 建立新生大鼠海马神经细胞原代培养的方法，并利用Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测培养过程中细胞早期凋亡和死亡情况。方法 取新生Wister大鼠，无菌条件下断头、取脑、解剖显微镜下分离出海马组织，采用胰蛋白酶消化和机械分离相结合方法分离神经细胞。接种在事先包被0.01％多聚左旋赖氨酸的35mm无菌培养皿，置于37℃ 10％CO2培养箱培养。24h后更换为培养液。3～5d天后加入阿糖胞苷抑制胶质细胞过度增殖，48h后更换为新鲜培养液。取培养6～8d细胞进行神经特异性烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染色。分别收获第0、1、3、5、8、11及18d细胞进行Annexin V-PI染色，利用流式细胞仪检测神经元早期凋亡和死亡。结果 相差显微镜下可见神经细胞，特征明显并形成典型的神经突起网络。NSE在神经细胞胞浆呈阳性着色。新分离细胞存活率为83.72％，早期凋亡率15.22％；随着培养时间延长，细胞存活率随时间降低，而死亡率与早期凋亡率增高。在每一检测点早期凋亡检出率所占绝对值平均为死亡率的5～10倍。结论 本研究中的细胞分离和培养技术可以获得较为理想的海马神经细胞；在培养过程中海马神经细胞的死亡率和早期凋亡率随着培养时间的延长而增高；细胞凋亡是导致神经元死亡的一个重要原因。