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食用土当归Aralia cordata Thunb.为五加科楤木属(Aralia)植物的根茎及根,味辛、苦,性微温,功效为祛风补虚、消肿止痛、除湿活血等,主要用于治疗痰瘀阻络、腰肌劳损、肝肾亏虚等证。《本草纲目》是食用土当归作为药用的第一次记录。 本论文从食用土当归总有机酸纯化工艺的优化、食用土当归药材及其纯化优化后总有机酸中贝壳杉烯酸和海松酸的含量测定、纯化优化后总有机酸的抗炎镇痛及有机酸成分的初步体外抗菌、抗肿瘤药效学和LPS诱导的模型大鼠体内抗炎作用机制方面进行研究,研究的主要内容及结果如下: 第一部分是在课题组前期研究总有机酸制备工艺的前提下,对食用土当归总有机酸进行纯化工艺的优化研究。首先通过酸碱滴定法,测定食用土当归中的总有机酸含量;按照课题组前期研究的制备工艺对食用土当归总有机酸进行提取和初步纯化,然后采用薄层层析-硅胶柱层析法结合重结晶法及吸附脱色法对初步纯化的总有机酸进一步优化。结果硅胶柱层析法对食用土当归总有机酸纯化优化的最佳洗脱条件是石油醚:乙酸乙酯(70:1),食用土当归药材中总有机酸的含量为3.4%,食用土当归优化纯化后总有机酸的含量为96%。 第二部分对食用土当归药材中贝壳杉烯酸和海松酸进行HPLC含量测定。结果,食用土当归药材中贝壳杉烯酸和海松酸的含量依次分别为0.4739%、0.5923%。 第三部分对食用土当归优化纯化后的总有机酸中的贝壳杉烯酸和海松酸进行HPLC含量测定。结果,优化纯化后总有机酸中的贝壳杉烯酸和海松酸的含量依次分别为35.94%、48.98% 第四部分对食用土当归优化纯化后总有机酸的抗炎镇痛药效学进行研究,对食用土当归有机酸成分:贝壳杉烯酸、海松酸、贝壳杉烯酸:海松酸(4:5)及优化纯化后的总有机酸的抗菌、抗肿瘤活性和LPS诱导的模型大鼠体内抗炎作用机制进行研究。通过采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、鸡蛋清致大鼠足跖肿胀法、热板刺激法、醋酸致小鼠扭体法、甲醛致小鼠疼痛法这5种抗炎镇痛方法,研究优化纯化后总有机酸的抗炎镇痛效果;选取临床常见耐药菌株大肠埃希菌标准株、金色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、以及铜绿假单胞菌,采用牛筋管法,观察有机酸成分的抗菌活性;以人白血病细胞株MV4-11,人乳腺癌细胞株MCF-7、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为对象,采用MTT法,观察有机酸成分的抗肿瘤活性;以适宜浓度的LPS诱导大鼠构建体内炎症模型,采用酶联免疫吸附法(Elisa)、硝酸还原酶法(Griess法)对血清中IL-1β、TNF-α、NO的含量进行测定,采用Western blot法对肺组织中JNK、p-JNK蛋白的水平进行测定,观察有机酸成分的抗炎活性及作用机制。 结果表明,食用土当归优化纯化后的总有机酸呈现出良好的抗炎镇痛效果;有机酸成分对6种常见致病菌均具有一定的抑制作用,尤其对铜绿假单胞菌抑菌活性最强,其中贝壳杉烯酸、海松酸、贝壳杉烯酸:海松酸(4:5)、纯化优化后的总有机酸之间的抑制效果无明显差异;有机酸成分对人乳腺癌细胞株MCF-7、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231无明显作用,对人白血病细胞株MV4-11的增殖具有显著的抑制作用,其中海松酸活性最强;有机酸成分中贝壳杉烯酸:海松酸(4:5)显著降低LPS诱导的模型大鼠血清中IL-1β、TNF-α和NO水平,海松酸则显著降低TNF-α水平,而贝壳杉烯酸、海松酸、贝壳杉烯酸:海松酸(4:5)和优化纯化后总有机酸对肺组织中炎症细胞因子聚集的抑制作用不具有显著性;此外有机酸成分可不同程度抑制肺组织中p-JNK蛋白的水平,其中纯化优化后总有机酸的活性最佳,表明示总有机酸具备较好的抗炎活性。