【摘 要】
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第一部分 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）基因克隆及真核表达质粒构建 目的:采用RT-PCR方法获得全长cDNA,并构建其真核表达质粒pcDNA3.1-TRAIL。 方法:收集3x10
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第一部分 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）基因克隆及真核表达质粒构建 目的:采用RT-PCR方法获得全长cDNA,并构建其真核表达质粒pcDNA3.1-TRAIL。 方法:收集3x106个Jurkat淋巴瘤细胞,Trizol试剂提取总RNA。经RT-PCR反转录,将细胞总RNA中的mRNA反转录成cDNA第一链,以cDNA为模板,dNTP,Taq酶等进行PCR反应,产物经琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,经DNA凝胶回收试剂盒回收纯化后进一步测序证实。 上游引物为:5′AGAATTCAGGATCATGGCTATGATGG3′,5′含有EcoRI的酶切位点 下游引物为:5′GAAGCTTCCAGGTCAGTTAGCCAACT3′,5′含有Hind Ⅲ的酶切位点 PCR产物经EcoRI、HindⅢ酶切后,回收酶切产物。插入经同样酶切的质粒PcDNA3.1中,T4DNA连接酶连接过夜,构建成真核表达质粒PcDNA3.1-TRAIL。PcDNA3.1-TRAIL经酶切后,电泳鉴定。
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