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[目的]从整体、细胞及分子水平,研究中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激及细胞凋亡的作用,以及筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞氧化应激及其凋亡的影响。[方法]1.整体实验将SD雄性大鼠随机分为正常组和造模组；用链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)一次性腹腔内注射SD大鼠的方法制作糖尿病模型。糖尿病模型成功后再随机分为模型组、筋脉通小、中、大剂量组和维生素C组,每组14只。筋脉通小、中、大组分别按成人剂量5倍、10倍和20倍给药；VC组按成人剂量10倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠灌胃16w处死。检测各组治疗前及治疗后4w、8w、12w和16w的体重和血糖变化；处死前测定大鼠的机械痛阈值；应用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测大鼠坐骨神经NADPH氧化酶phox p22亚基、iNOS、Bcl-2及Caspase-3的表达。2.细胞实验体外培养雪旺细胞,S-100蛋白进行鉴定。取第3代雪旺细胞,加入DMEM、50mmolGlu培养液以及含50mmolGlu的筋脉通(JMT)和维生素C(VC)含药血清进行培养；采用TUNEL法测定各组雪旺细胞凋亡的情况；应用激光扫描共聚焦显微技术和实时荧光定量PCR法检测NADPH氧化酶phox p22亚基、iNOS、Bcl-2、Caspase-3表达水平的变化。[结果]1.整体实验(1)血糖和体重造模前各组体重无明显差异(P>0.05)。造模成功后,模型组及各治疗组大鼠血糖显著高于正常组(P〈0.01)；模型组及治疗组间比较,大鼠4周、8周、12周、16周血糖均无明显差异(P>0.05)。模型组及各治疗组大鼠4周、8周、12周、16周体重显著低于正常组(P<0.01)；模型组及治疗组间比较,大鼠4周、8周、12周、16周体重均无明显差异(P>0.05)。(2)机械痛阈值检测：与正常组相比,模型组、筋脉通大、小剂量组、VC组机械痛阈值显著降低(P〈0.01)；筋脉通中剂量组无明显降低(P>0.05)。与模型组相比,各治疗组的痛阈值显著升高(P〈0.01)。与维生素C组相比,筋脉通中剂量组痛阈值有显著升高(P〈0.01)。筋脉通各剂量组间比较,筋脉通中剂量组痛阈值升高最明显(P<0.01)。(3)坐骨神经NADPH氧化酶phox p22亚基表达模型组p22亚基的积分光密度值较正常组显著升高(P<0.01)。各治疗组积分光密度值较模型组均有显著下降(P<0.01)。筋脉通中剂量组积分光密度值明显低于筋脉通小剂量组和维生素C组(P〈0.05,P<0.01)。(4)坐骨神经NADPH氧化酶phox p22亚基mRNA表达模型组p22亚基mRNA值较正常组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,筋脉通大、中、小剂量组的mRNA值均有明显下降(P〈0.01,P<0.01,P〈0.05),维生素C组下降不明显(P>0.05)。与维生素C组相比,筋脉通小、中剂量组的p22亚基mRNA值明显下调(P〈0.05,P<0.01)。(5)坐骨神经iNOS表达模型组iNOS积分光密度值较正常组显著升高(P<0.01)。各治疗组积分光密度值较模型组均有显著降低(P<0.01)。筋脉通中剂量组的积分光密度值明显低于筋脉通小剂量组和维生素C组(P<0.01)。(6)坐骨神经Bcl-2表达模型组和各治疗组的Bcl-2积分光密度值较正常组显著下降(P<0.01)。筋脉通小、中剂量组积分光密度值较模型组均有显著增高(P<0.01)。筋脉通中剂量组的积分光密度值明显高于维生素C组(P<0.01)。(7)坐骨神经Bcl-2 mRNA表达模型组的Bcl-2 mRNA值均较正常组显著降低(P<0.01)。与模型组相比,筋脉通大、中、小剂量组的Bcl-2 mRNA值均有明显上调(P<0.01),维生素C组上调不显著(P>0.05)。与维生素C组相比,筋脉通大、中、小剂量组的Bcl-2mRNA值明显增高(P<0.01)。(8)坐骨神经Caspase-3表达模型组的Caspase-3积分光密度值较正常组显著增高(P<0.01)。筋脉通中、大剂量组积分光密度值较模型组均有显著降低(P<0.01,P<0.05)。筋脉通中剂量组的积分光密度值明显低于筋脉通小剂量组和维生素C组(P<0.05,P<0.01)。(9)坐骨神经Caspase-3 mRNA表达模型组的Caspase-3 mRNA值较正常组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,筋脉通大、中、小剂量组mRNA值均有明显下调(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。与维生素C组相比,筋脉通中剂量组的Caspase-3 mRNA值明显下降(P<0.05)。2.细胞实验(1) NADPH氧化酶phox p22亚基mRNA表达①Glu组雪旺细胞p22亚基mRNA表达水平较正常组明显升高(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组雪旺细胞mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。③JMT组雪旺细胞p22亚基mRNA表达水平显著低于VC组(P<0.01)。(2)SC中iNOS表达①Glu组及治疗组雪旺细胞iNOS的荧光强度值较正常组明显升高(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组与VC组雪旺细胞iNOS的荧光强度值明显降低(P<0.01)。③JMT组的荧光强度值要明显低于VC组(P<0.01)。(3)SC中Bcl-2表达①Glu组雪旺细胞Bcl-2的荧光强度值较正常组明显降低(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组雪旺细胞Bcl-2的荧光强度值明显升高(P<0.01),VC组升高不明显(P>0.05)。③JMT组Bcl-2mRNA值显著高于VC组(P<0.01)。(4) Bcl-2 mRNA表达①Glu组雪旺细胞Bcl-2 mRNA表达水平较正常组明显降低(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组与VC组雪旺细胞Bcl-2-mRNA表达水平均增高(P<0.01)。③JMT组雪旺细胞Bcl-2 mRNA表达水平高于VC组(P<0.05)。(5)SC中Caspase-3表达①Glu组雪旺细胞Caspase-3的荧光强度值较正常组明显升高(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组与VC组雪旺细胞Caspase-3的荧光强度值明显降低(P<0.01)。③JMT组的荧光强度值要明显低于VC组(P<0.01)。(6) Caspase-3 mRNA表达①Glu组雪旺细胞Caspase-3mRNA表达水平较正常组明显升高(P<0.01)。②与Glu组相比,JMT组与VC组雪旺细胞Caspase-3 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。③JMT组雪旺细胞Caspase-3 mRNA表达水平低于VC组(P<0.01)。(7)雪旺细胞凋亡百分率①正常组未见雪旺细胞凋亡。②Glu组及其各治疗组雪旺细胞凋亡明显增加(P<0.01)。③与Glu相比,JMT组雪旺细胞的凋亡百分率明显降低(P<0.01),VC组降低不明显(P>0.05)。④JMT组雪旺细胞的凋亡百分率明显低于VC组(P<0.01)。[结论]1.整体实验(1)空腹单次腹腔注射STZ 60mg/kg后16周DPN模型建立,检测DM组大鼠机械痛阈值显著降低,证实DPN模型成功；筋脉通干预后显著提高DM大鼠的机械痛阈值。(2)DM大鼠坐骨神经NADPH氧化酶phox p22亚基、iNOS表达显著升高。(3)筋脉通能显著降低DM大鼠坐骨神经NADPH氧化酶p22亚基和iNOS的表达,优于维生素C。(4)DM大鼠坐骨神经Bcl-2表达降低,Caspase-3表达显著升高。(5)筋脉通干预后,坐骨神经Bcl-2表达明显升高,Caspase-3表达显著降低,优于维生素C。2.细胞实验(1)采用组织贴块法原代培养,经差速贴壁法+低浓度胰蛋白酶消化法+G418纯化的Wistar乳鼠坐骨神经雪旺细胞,并经S-100蛋白免疫组化鉴定,纯度可达90%左右,成功建立SC原代模型。(2)高糖培养环境下雪旺细胞NADPH氧化酶p22亚基和iNOS表达增高。(3)高糖环境培养下SC凋亡百分率明显增加,Bc卜2表达降低,而Casase-3表达显著升高。(4)筋脉通含药血清显著降低NADPH氧化酶p22亚基和iNOS的表达,优于维生素C。(5)筋脉通含药血清显著降低SC的凋亡百分率,并显著提高Bcl-2的表达,降低Caspase-3的表达,优于维生素C。[创新点]从整体、细胞及分子水平,研究中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激及细胞凋亡的作用,以及筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞氧化应激及其凋亡的影响,经检索国内外文献未见报道。