【摘 要】
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目的:活络效灵丹是清代医家张锡纯《医学衷中参西录》中的一首经典方剂,由当归、丹参、乳香、没药各15g组成,具有活血祛瘀、通络止痛的功效。为了探讨活络效灵丹对体外心肌细
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目的:活络效灵丹是清代医家张锡纯《医学衷中参西录》中的一首经典方剂,由当归、丹参、乳香、没药各15g组成,具有活血祛瘀、通络止痛的功效。为了探讨活络效灵丹对体外心肌细胞缺血再灌注损伤(Myocardial Ischemia Reperfusion Injury,MIRI)的影响,本课题建立体外大鼠心肌细胞(H9C2s)缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤模型,研究活络效灵丹对心肌细胞的药理作用和相关的分子机制,以阐明活络效灵丹对H/R损伤H9C2s的保护作用,为寻找有效的抗心肌细胞H/R损伤的药物和方法提供实验依据。方法:采用MTT法检测不同浓度的活络效灵丹供试药对H9C2s存活率的影响。采用物理造模法建立H/R损伤模型。运用酶学方法检测受损H9C2s中一氧化氮(NO)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力,探讨活络效灵丹对H/R损伤H9C2s的药理作用。用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测该方对H/R损伤H9C2s Wnt/β-catenin信号通路中GSK-3βm RNA、Axin1 m RNA、β-catenin m RNA和C-myc m RNA表达的影响,探讨活络效灵丹对H/R损伤H9C2s的相关分子机制。结果:活络效灵丹对正常H9C2s无毒性且具有增殖作用。选择缺氧24h,复氧2h作为最佳造模条件。活络效灵丹可提高受损细胞NO的浓度、提升T-SOD活力,并降低受损细胞的LDH活性。活络效灵丹能在缺氧6h、复氧2h时上调受损H9C2s Wnt/β-catenin信号通路中GSK-3βm RNA和Axin1 m RNA的表达;在缺氧12h、复氧2h时抑制受损H9C2sβ-catenin m RNA和C-myc m RNA的表达。结论:1.活络效灵丹对H9C2s无药物毒性,且对其有增殖作用;H/R过程可诱导H9C2s损伤,活络效灵丹能够提高H/R损伤H9C2s的存活率;该方可调节受损细胞内NO浓度、LDH活性和T-SOD活力,具有减轻H9C2s H/R损伤的作用。2.活络效灵丹抗H/R损伤的机制与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。
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