瑞芬太尼是目前临床麻醉中应用日益广泛的一种新型阿片类镇痛药。研究表明,阿片受体参与介导了缺血预处理的心肌保护作用,阻断阿片受体可完全消除其心肌保护作用。进一步的研究亦发现,通过激动阿片受体同样可产生心肌保护作用。作为一种非选择性阿片受体激动剂,有研究证实瑞芬太尼具有预处理的早期心肌保护作用,但是目前尚不清楚瑞芬太尼是否可产生延迟性心肌保护作用。作为体内的一种重要化学递质和细胞内信号分子,一氧化氮（NO）在心肌缺血-再灌注处理中的作用一直是人们研究的热点。在正常生理情况下,NO主要是由血管内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）催化合成。研究表明,NO具有舒张血管、抑制血小板粘附聚集、抑制中性粒细胞粘附聚集、抗Ca²⁺超载等作用。晚近研究表明,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在药物预处理的心肌保护机制中发挥着重要作用,并参与触发和/或介导延迟性心肌保护作用。但是目前关于一氧化氮合酶（NOS）与阿片类药物预处理心肌保护作用关系的研究甚少,尚无研究报道eNOS和/或iNOS是否参与了瑞芬太尼预处理的心肌保护作用。本课题针对瑞芬太尼预处理的延迟性心肌保护作用与NO的关系以及eNOS和iNOS在其中所发挥的作用进行了研究,旨在进一步探讨瑞芬太尼预处理延迟性心肌保护作用的机制。本研究共包括三个部分。第一部分瑞芬太尼预处理延迟性心肌保护作用的研究采用健康雄性Wistar大鼠,随机分为7组:1组（生理盐水组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉以0.1 ml/kg/min的速率输注生理盐水5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min;2组（生理盐水+纳络酮组）:在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注生理盐水5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min,在首次静脉输注生理盐水前10 min静脉注射纳络酮0.1 mg/kg;3组（瑞芬太尼12 h组）,在缺血-再灌注处理前12 h静脉输注瑞芬太尼进行预处理;4组（瑞芬太尼24 h组）,在缺血-再灌注处理前24 h静脉输注瑞芬太尼进行预处理;5组（瑞芬太尼48 h组）,在缺血-再灌注处理前48 h静脉输注瑞芬太尼进行预处理;6组（瑞芬太尼72 h组）,在缺血-再灌注处理前72 h静脉输注瑞芬太尼进行预处理;7组（瑞芬太尼24 h+纳络酮0.1 mg/kg组）,在缺血-再灌注处理前24 h静脉输注瑞芬太尼进行预处理,在静脉输注瑞芬太尼预处理前10 min静脉注射纳络酮0.1 mg/kg。瑞芬太尼预处理的实施方法:应用生理盐水将瑞芬太尼配制成20μg/ml溶液,采用微量注射泵输注瑞芬太尼,输注速率为2μg/kg/min（相当于0.1 ml/kg/min）,输注时间为5 min,重复处理3次,间隔时间为5 min。所有大鼠均经历30 min的缺血和120 min的再灌注处理。每组包括符合要求的大鼠6只。实验过程中连续监测心率（HR）、平均动脉压（MAP）和Ⅱ导联心电图（ECG）;在缺血前即刻、缺血末和再灌注末分别抽取动脉血,测定CK-MB血浆浓度;实验结束测定心肌梗死面积。结果显示,各组缺血前的HR、MAP、RPP和CK-MB血浆浓度基础值无显著差异（P＞0.05）。缺血15 min、30 min和再灌注30 min、60 min、90 min、120 min时的HR、MAP和血压-心率乘积（rate pressure product,RPP）在各组之间亦无显著性差异（P＞0.05）。与1组相比,2组、3组、6组和7组缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度和心肌梗死面积无显著性差异（P＞0.05）,但是4组和5组缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度显著降低（P＜0.05）,心肌梗死面积显著缩小（P＜0.05）:与3组和6组相比,4组和5组缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度显著降低（P＜0.05）,心肌梗死面积显著缩小（P＜0.05）;缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度和心肌梗死面积在4组和5组之间无显著性差异（P＞0.05）。第二部分瑞芬太尼预处理对心肌组织内源性N0生成系统的影响采用健康雄性Wistar大鼠,随机分为2组:1组（生理盐水组）,经尾静脉以0.1ml/kg/min的速率输注生理盐水5 min进行预处理,重复3次,间隔时间为5 min,分别在给予生理盐水后12 h、24 h、48 h和72 h后开胸切取心脏;2组（瑞芬太尼组）,经尾静脉输注瑞芬太尼5 min进行预处理,输注速率为2μg/kg/min,重复进行3次,间隔时间为5 min,分别于给予药物12 h、24 h、48 h和72 h后开胸切取心脏,采用电化学微传感器法测定心肌组织的NO代谢产物含量,采用蛋白印迹技术定量分析心肌组织eNOS和iNOS的表达。每个时间点选取6只大鼠。另取6只大鼠的心脏作为正常对照。电化学法的测定结果显示,在瑞芬太尼预处理后24 h和48 h,2组心肌组织NO代谢产物的含量显著高于1组（P＜0.05）,但在12 h和72 h时,两组心肌组织NO代谢产物的含量无显著性差异（P＞0.05）;与瑞芬太尼预处理后12 h和72 h时相比,2组在24 h和48 h时心肌组织的NO代谢产物含量显著升高。蛋白印迹分析结果显示,与正常心肌组织相比,两组心肌组织的eNOS蛋白表达水平均无显著性改变（P＞0.05）;与1组相比,2组在瑞芬太尼预处理后24 h和48 h时心肌组织的iNOS蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与瑞芬太尼预处理后12 h和72 h时相比,2组在24 h和48 h时心肌组织的iNOS蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。第三部分诱导型一氧化氮合酶在瑞芬太尼预处理延迟性心肌保护机制中的角色采用健康雄性Wistar大鼠,随机分为6组:1组（生理盐水组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注生理盐水5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min;2组（生理盐水+急性期SMT组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注生理盐水5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min,在结扎冠状动脉左前降支前10 min静脉给予iNOS抑制剂Smethylthiourea（SMT）10 mg/kg;3组（生理盐水+延迟期SMT组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注生理盐水5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min,随后经尾静脉给予SMT 10 mg/kg;4组（瑞芬太尼组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注瑞芬太尼5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min;5组（瑞芬太尼+急性期SMT组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注瑞芬太尼5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min,在结扎冠状动脉左前降支前10 min静脉应用SMT 10 mg/kg;6组（瑞芬太尼+延迟期SMT组）,在缺血-再灌注处理前24 h经尾静脉输注瑞芬太尼5 min进行预处理,重复进行3次,间隔时间为5 min,随后经尾静脉给予SMT 10 mg/kg。所有大鼠均经历30 min的局部缺血（结扎LAD）和120 min的再灌注,实验过程中连续监测HR、MAP和Ⅱ导联ECG;在缺血前即刻、缺血末和再灌注末分别抽取动脉血,测定CK-MB的血浆浓度;实验结束后测定心肌梗死面积。结果显示,各组缺血前的HR、MAP、RPP和CK-MB血浆浓度基础值无显著差异（P＞0.05）。缺血15 min、30 min和再灌注30 min、60 min、90 min、120 min时的HR、MAP和RPP在各组之间亦无显著性差异（P＞0.05）。与1组相比,2组、3组和5组再灌注末的CK-MB血浆浓度和心肌梗死面积无显著差异,而4组和6组缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度和心肌梗死面积显著减小（P＜0.05）;与4组相比,5组在缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度显著升高（P＜0.05）,6组缺血末和再灌注末的CK-MB血浆浓度无显著变化。通过本研究,我们得出以下结论:1.瑞芬太尼预处理可产生延迟性心肌保护作用,其发生在预处理后24～48 h,阿片受体在瑞芬太尼预处理的延迟性心肌保护机制中发挥关键作用。2.瑞芬太尼预处理可显著改善心肌组织NO的产生和iNOS的表达,但对eNOS的表达无显著影响。3.瑞芬太尼预处理的抗心肌缺血效应与NO具有相关性,iNOS是瑞芬太尼预处理延迟性心肌保护效应的介导因子,而非触发因子。