5-azacytidine诱导黄曲霉突变株的筛选及鉴定

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:qqifha
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黄曲霉毒素(Aflatoxins,AF)是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)等产毒菌种产生的一类次生代谢产物,是目前发现的毒性和致癌性最强的天然污染物之一。本研究通过DNA甲基化抑制剂5-azacytidine诱导黄曲霉标准菌株133,获得了一株可以稳定遗传而且不产毒的黄曲霉突变菌株NT,通过ITS序列鉴定发现NT与野生型菌株的ITS序列完全匹配。通过对突变菌株的生长特性分析发现,5-azacytidine诱导得到的黄曲霉突变菌株,较野生型菌株具有较快的生长速率,菌落呈白色;突变菌的菌丝尖端长度为331.9±131.2μm,而野生型菌为141.7±31.7μm;突变菌菌丝隔膜变长,其中突变菌的隔膜长度为66.7±19.9μm,野生型黄曲霉则为49.1±14.1μm;产孢延迟且产孢量急剧下降,在形态上有较大的差异。采用薄层析法(TLC)对黄曲霉突变菌株的代谢产物合成情况进行分析,结果发现突变菌株在培养基中并没有检测到产毒素,但在其菌内却可以检测到少量的AFB2,可能是5-azacytidine诱导后除了AF合成变少外,AF分泌到孢外可能受到了抑制。为了进一步了解突变菌产毒及其形态是如何建成的,本研究通过荧光定量PCR检测黄曲霉突变菌株中和产毒相关和产孢相关的基因的表达情况,突变体中的产毒结构基因aflD在96h时下降了79.51倍,产毒调控基因aflR下调了4.55倍;而突变菌中产孢特异基因abaA和brlA在96h的时候,分别比野生型下调了48.26倍和66.99倍,mRNA表达水平检测结果与产毒和产孢检测情况一致。为了进一步研究产毒受抑制的机理,本研究对突变菌株的氧化应激水平进行了研究,结果表明,黄曲霉突变菌对过氧化氢相对比较敏感,在H2O2浓度为10μmol/L时,5-azacytidine诱变的突变菌的生长就受到了抑制;而菌内的脂质体氧化水平和谷胱甘肽含量检测实验表明,突变菌内的氧化水平比野生型菌株相对较低,可能是由于突变菌体内的氧化应激系统遭到了破坏。本研究旨在从一个全新的角度认识黄曲霉的产毒机理,探究5-azacytidine对黄曲霉的生理影响,进一步揭示丝状真菌次生代谢产物的调控及形态的建成。
其他文献
本文通过案例分析法对我国上市公司股份支付实施情况进行研究,研究发现,我国上市公司在股份支付方面存在盈余管理现象,上市公司利用股票期权公允价值确定、授予日确定以及等
本文所谓的“清代《宋史》学”,是指清顺治元年(1644)至宣统三年(1911)二百六十余年间,清代学人从历史编纂文本《宋史》出发,在清代学术大势的观照下,对其改修补撰、纠谬考证
《连锁》作为《聊斋志异》中书写人鬼恋的著名篇章之一,讲述了连锁与杨于畏从相识到相恋的故事。在《连锁》中,连锁对杨生并非一见钟情,而是建立在对其才学肯定基础上的红颜
计算机教学是适应时代发展和社会进步的产物,对帮助学生开拓眼界,较好较快的适应社会具有重要作用。我国的高职教育是注重实用性的教育层面,在高职院校已经普遍开设了计算机
<正>"过去十年,德鲁克武装了中国企业家的头脑;未来十年,稻盛将充实中国企业家的灵魂"。时下,稻盛哲学在中国企业界影响日益广泛而深入,恰好验证了白立新博士的断言:"过去十
目的:评价应用The WAND无痛口腔局麻注射仪囊腔内注射硬化剂治疗舌前腺囊肿的临床效果。方法:实验组使用The WAND进行舌前腺囊肿囊腔内注射5%鱼肝油酸钠或4%碘酊,对照组使用
客房服务的实质是服务主体之间产生相互作用的交互过程,提高服务交互质量有助于从根本上提高客房服务质量。目前饭店业内存在三种客房服务模式:前台直管模式、楼层服务台模式
文章结合在建的青岛胶州湾隧道工程,对隧道防排水原则、防排水系统设计、防排水材料室内实验及防排水系统施工质量控制等方面进行了研究。提出预埋可重复注浆管、设置渗水盲
目前,我国的温泉旅游还是以休闲娱乐文化为主,注重的是一种放松的体验,而对养生方面的研究十分滞后。没有文化的旅游是没有魅力的,没有旅游的文化是没有活力的。对于温泉旅游
<正>目前,国内企业界在弘扬中华优秀传统文化,重建商业文明,实现中国梦大势之下,越加认识到稻盛哲学的价值,并纷纷考虑导入稻盛哲学。稻盛和夫先生以其秉持中国古圣贤之道创