论文部分内容阅读
果蝇生殖干细胞，是一类具有自我更新和分化能力的生殖细胞，主要通过不对称分裂的方式产生两个子代细胞，其中一个子细胞维持干细胞特性，另一个子细胞则走向分化。这是由微环境提供的外源信号，通过一系列信号通路调控干细胞的内源基因来完成。Bam(bag-of-marbles)是果蝇两性配子发生过程中的一个调节因子，在雌性果蝇中，Bam不仅调节生殖干细胞到包囊母细胞的分化，而且还参与包囊母细胞的不完全胞质分裂。在雄性果蝇中，Bam参与调节精原细胞从有丝分裂向减数分裂的转换。bam是一个关键的促进分化的基因。果蝇卵巢中GSC自我更新和分化的平衡是由Nanos-Pumilio翻译抑制复合体与Bam表达之间的拮抗关系所介导的。 本研究中，我们利用强化学诱变剂EMS对生物体染色体碱基的烷基化修饰作用这一原理，以黑腹果蝇为实验材料，通过EMS诱变处理，对果蝇染色体引入突变。利用IHC观察比较在完全相同热激条件下对照组hs-bam/TM3与突变体hs-bamEMS/TM3果蝇卵巢尖端结构的差异。经过约1400管果蝇单杂的大量筛选后，我们得到6个有潜在意义的hs-bamEMS/TM3突变体品系，提取对照组hs-bam/TM3和突变体hs-bamEMS/TM3果蝇的基因组，分别用TransStartFastPfuDNAPolymerase扩增出bam序列，然后送测序。最后将BamEMS蛋白和Bam蛋白进行氨基酸序列比对，结果显示，BamEMS蛋白分别有D301G和S416W，M2921，E250G和I361V，L340H，C373Y，C45Y的氨基酸突变并且没有提前终止表达。另外，我们还通过定点突变，将bam基因中的25个赖氨酸分别突变成精氨酸，并获得对应的转基因果蝇品系，初步的实验结果表明K134R，K270R，K272R和K286R四个氨基酸突变位点对果蝇生殖干细胞没有造成影响。