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精子发生是一个需要多种细胞共同参与的过程，其中支持细胞由于其特异的生理功能，对精子发生发挥着重要的作用。大量研究表明，支持细胞的增殖受到miRNA以及其它因子的调节。课题组前期研究发现环指蛋白4（ring finger protein4，RNF4）与雄激素受体（androgen receptor,AR）在猪睾丸细胞(swine testicular cell，ST)内共定位，并可能通过AR影响ST细胞生长。本课题在这个实验结果的基础上，以AR基因为主要研究对象，探究AR是否和RNF4存在互作以及AR在ST细胞增殖中的功能，并探究调控AR表达的分子机制。本课题主要研究结果如下: 1、RNF4与AR互作的研究 通过Co-IP证明AR和RNF4在ST细胞内结合，缺失AR基因DBD(DNA binding domain)结构域后，AR与RNF4的结合消失。 2、AR在睾丸组织中的表达以及对ST细胞的影响 通过组织切片免疫荧光技术检测AR在性成熟前后大白猪睾丸中的表达。实验结果表明在60日龄和180日龄的大白猪睾丸中，AR均有表达。 构建AR的超表达载体以及合成AR的干扰片段，通过qRT-PCR和Western blot验证了超表达和干扰效果。通过流式细胞仪检测AR对ST细胞周期进程的影响，通过CCK8检测AR对细胞活力的影响。结果显示AR可以促进细胞周期进程，促进细胞增殖。在缺失了AR的DBD结构域后，AR对细胞周期和细胞增殖的影响消失，说明AR是通过和RNF4结合影响ST细胞的功能。 3、miR-124a对ST细胞功能的影响 通过双荧光素酶报告系统验证了miR-124a可以与AR基因3UTR的90bp-96bp位点结合从而影响其荧光活性，进一步验证发现miR-124a mimic可以抑制AR的表达，表明AR是miR-124a的潜在靶基因。 通过流式细胞仪检测miR-124a对ST细胞周期进程的影响，通过CCK8检测miR-124a对细胞活力的影响。结果显示miR-124a mimic可以抑制细胞周期进程，抑制细胞增殖。综合以上结果表明miR-124a通过AR抑制猪未成熟睾丸支持细胞的增殖。