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研究背景与目的慢性间歇低氧(CIH)是造成OSAHS患者心血管系统以及其他脏器损害的主要病理因素,其反复发生的低氧/再氧合过程可以引起机体的氧化应激反应,被认为是心血管系统损伤的主要病理基础,但是关于慢性间歇低氧诱发的氧化应激引起心血管系统损伤的具体机制以及间歇低氧程度对心血管系统氧化应激反应的影响程度尚不十分清楚。鉴于上述原因,我们建立了不同程度间歇低氧大鼠模型,观察大鼠血清、血管内皮系统及心肌组织氧化应激相关指标的变化,以评价心血管系统氧化应激反应的程度以及不同程度间歇低氧对氧化应激的影响,探讨间歇低氧所致氧化应激在心血管系统损伤中的重要作用,进一步明确间歇低氧诱发心血管系统损伤的机制,为后续寻找OSAHS(?)心血管并发症的防治措施提供实验数据和理论依据。内容1.不同程度间歇低氧大鼠模型的建立。2.不同程度间歇低氧大鼠血清MDA与抗氧化指标的变化。3.不同程度间歇低氧大鼠血管内皮系统氧化应激的变化。4.不同程度间歇低氧对大鼠心肌组织氧化应激的影响。方法第一部分：建立不同程度间歇低氧大鼠模型,雄性Wistar大鼠160只,分为5组：5%间歇低氧组(IH1),7.5%间歇低氧组(IH2),10%间歇低氧组(IH3),10%持续低氧对照组(CH组)和常氧对照组(SC组),每组32只大鼠,给予相应低氧刺激；于暴露第2,4,6,8周每组分别随机抽取8只大鼠麻醉后处死,取血清及主动脉内皮和心肌组织待用。第二部分：应用化学法检测不同程度间歇低氧暴露不同时间后大鼠血清丙二醛(MDA)的含量、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。第三部分：应用Real-time PCR法检测各组大鼠主动脉内皮组织NADPH氧化酶亚基P22phox、NOX2mRNA和硫氧还蛋白mRNA表达水平。第四部分：应用化学法分别测定各组心肌组织匀浆上清液中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性；应用Real-timePCR法检测5%间歇低氧组(IH1)、持续低氧对照组(CH组)和常氧对照组(SC组)心肌组织NADPH氧化酶亚基P22phox、NOX2mRNA和硫氧还蛋白mRNA表达水平。结果第一部分：不同程度间歇低氧大鼠血气分析结果显示,5%间歇低氧组、7.5%间歇低氧组、10%间歇低氧组大鼠最低PO2分别为35.6mmHg,40.3mmHg,48.8mmHg;持续低氧组大鼠PO2维持在37.4-39.6mmHg之间,常氧对照组大鼠PO2为98-102mmHg。第二部分：1.不同程度间歇低氧组大鼠血清MDA含量明显升高,同时伴有血清T-AOC、 SOD及GSH-PX活性的下降。随暴露时间的延长,血清MDA含量逐渐增加,而血清T-AOC、SOD及GSH-PX活性逐渐降低,于6周时变化最为明显,8周时变化趋于平缓。2.不同程度间歇低氧组相比,5%间歇低氧组血清MDA含量升高最为明显,6周时显著高于7.5%间歇低氧组和10%间歇低氧组(P值分别为0.040和0.013)；而血清T-AOC、SOD及GSH-PX (?)舌性的变化均以5%间歇低氧组最为明显。3.双变量相关分析结果显示,MDA与SOD (r=-0.410, P=0.000)、MDA与GSH-PX (r=-0.462, P=0.000)、MDA与T-AOC (r=-0.428, P=0.000)均呈负相关关系。第三部分：1.5%间歇低氧组内皮组织NADPH氧化酶亚基P22phox mRNA表达水平随时间出现增高趋势,6周时最为明显,显著高于该组2周(P=0.010)和4周(P=0.011)时水平,8周时变化趋于平缓；不同程度间歇低氧组之间P22phox mRNA表达水平不同,暴露6周时5%间歇低氧组显著高于10%间歇低氧组(P=0.023)。2.5%间歇低氧组内皮组织TRX mRNA表达水平随时间出现升高趋势,暴露6周和8周时均显著高于2周和4周时水平；不同程度间歇低氧组之间TRX mRNA表达水平不同,暴露6周和8周时5%间歇低氧组显著高于10%间歇低氧组(P值分别为0.004和0.015)。第四部分：1.3组间歇低氧暴露大鼠心肌组织匀浆上清液中MDA含量均随时间呈现升高趋势,而T-AOC和SOD活性则随时间逐渐下降,变化均于6周时最为明显,8周时趋于平稳；在不同程度间歇低氧组之间,5%间歇低氧组变化最为显著,该组MDA含量于4周时显著高于10%间歇低氧组(P=0.032)。2.5%间歇低氧暴露6周后心肌组织中NADPH氧化酶亚基P22phox mRNA表达水平显著高于常氧对照组(P=0.003)和持续低氧组(P=0.007),而且8周时仍高于常氧对照组(P=0.012)。3.5%间歇低氧组TRX mRNA表达水平随时间逐渐升高,6周和8周时均显著高于2周时水平(P值分别为0.028和0.012);而且6周时表达水平明显高于常氧对照组(P=0.015),这种变化至8周时仍继续存在(P=0.001)。结论1.慢性间歇低氧可以引起机体发生氧化应激反应,表现为脂质过氧化水平的增高,同时伴有抗氧化水平的降低,而且上述变化随暴露时间延长逐渐加重,但在一定时间后逐渐趋于平稳,可能与机体的适应性保护机制有关。2.慢性间歇低氧引起的氧化应激反应具有程度依赖性,重度间歇低氧引起的氧化应激反应最为明显。3. NADPH氧化酶在心血管系统活性氧产生的过程中具有重要作用,可能参与了慢性间歇低氧所致心血管系统损伤的病理过程。4.慢性间歇低氧能引起心血管系统硫氧还蛋白(?)nRNA表达的增加,间歇低氧程度越重,影响越显著,硫氧还蛋白系统可能在慢性间歇低氧所致心血管系统损伤过程中具有重要作用。