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生物表面活性剂(BS,biosurfactant)通常是指由微生物产生的既含亲水性基团又具有亲油性基团的化合物。通常由自然界中的细菌、酵母和真菌代谢产生,特别是在难溶于水的基质中生长的细菌其产量较高。其中脂肽类BS主要由芽孢杆菌属代谢产生的环状脂肽,表面活性素(surfactin)因具有特殊的表面活性而闻名,该产生菌广泛分布在土壤和植物根际的上层,经常被暴露在恶劣的环境条件下,为了适应恶劣的环境,枯草芽孢杆菌通过合成表面活性素促进菌株自身吸附、乳化、润湿、分散或溶解难溶性物质。Surfactin一般由7个氨基酸的小肽通过内酯键与C13-C15的β-羟基脂肪酸相连形成环状脂肽,具有抗菌、抗病毒、提高石油采收率和溶血等作用,在工业、环境、农业、食品和日化产业中具有广泛的应用及较大的需求量,但是目前surfactin的生物产量极低以及提取纯化难度大成本高,其产量满足不了目前市场的需求。主要研究及其结果如下:利用表面活性素的表面活性及溶血性,将氯化十六烷基吡啶-溴百里酚蓝(CPC-BTB)显色反应与血琼脂平板实验相结合进行筛选,主要的样品来自广东省佛山市某加油站地下土壤,从中分离到一株产表面活性剂的细菌。然后,经过生理生化实验及16S r RNA测序分析鉴定该菌株为一株枯芽孢杆菌,并命名为Bacillus subtilis SX-20。对SX-20发酵所产生的产物先通过酸沉淀,再甲醇溶液萃取,最后真空旋转蒸发进行提取。对该产物性质及结构分析鉴定采取以下方法:⑴驱油试验和液滴坍塌试验;⑵傅里叶红光变换光谱(FTIR);⑶氨基酸分析;⑷液相质谱联用(LCMS);⑸抑菌实验。确定了SX-20发酵的粗略提取产物是由15个碳原子的脂肪酸链和氨基酸(Asp:Glu:Val:Leu比值为1:2.5:1:4)构成的环状的脂肽类表面活性剂surfactin C。活性分析结果表明,该surfactin C对痤疮丙酸杆菌具有抑制效果,目前类似的研究尚未见报道。为了提高surfactin C的产量,通过单因子实验对Landy发酵培养基及发酵条件进行优化,并进行了Plackett-Burman(PB)实验。结果表明,Landy培养基的成分对该菌合成表面活性素的影响不显著。然而,改变接种量、发酵温度和发酵时间的分析结果表明,当接种量为5%在25°C下发酵培养36 h后,surfactin C产量可达1.03 g/L。另外,为了进一步提高SX-20菌株产Surfactin C水平,从B.subtilis168中扩增出强启动子P43、Papr E和Pglv,并通过同源重组方法来替换SX-20的srf A基因的启动子序列,以期提高srf A的表达水平并促进Surfactin C的合成,目前此研究仍在进行中。