论文部分内容阅读
研究表明食用菌多糖具有显著的增强免疫力、降血压、降血脂、抗氧化及抗肿瘤等活性。鲍鱼菇(Pleurotus abalonus Han, K.M.Chen et S.Cheng)为担子菌类松茸科(Tricholomataceae)侧耳属,食用菇菌类。目前,国内外对鲍鱼菇的研究尚处初级阶段,关于鲍鱼菇多糖(PAP)的组成特征及生物活性研究却少有报道。本文以福建购进鲍鱼菇干品为材料,PAP的提取、分离纯化、结构特征及生物活性做了深入的研究。1通过超声波辅助热水提取法获取PAP。采用Box-Behnken设计响应面分析法(Response Surface Methodology. RSM)对PAP的提取工艺进行优化。结果显示,PAP超声辅助热水提取的最优条件为：超声波功率165.46W、提取时间57.89min、提取温度71.41℃、液固比25.78,为了实际操作的方便,将最优培养条件修正为：功率165W、提取时间60min、提取温度70℃、液料比26,并测定多糖得率为3.42%。并测得其总糖含量为67.0%。2通过Sevag除蛋白,活性炭吸附法脱色后,经DEAE-52纤维素离子交换柱分离,得含量较大的两个组分0.05M及0.1MNaCl洗脱部位分别命名为PAP-1、PAP-2,经G-150葡聚糖凝胶柱分析,所得的PAP-1、PAP-2均为均一组分,并对其理化性质及结构进行初步分析。理化性质测试及紫外全波长扫描结果显示,两个组分均不含淀粉、蛋白质、氨基酸、多肽和核酸等杂质。红外波普扫描结果显示,PAP-1、PAP-2均为杂多糖。PMP柱前衍生化HPLC-UV分析结果显示,组成PAP-1的单糖有甘露糖(D-mannose),鼠李糖(L-rhamnose),葡萄糖(D-glucose)及半乳糖(D-galactose),其摩尔百分比为1.08：1.00：84.58：2.09,组成PAP-2的单糖有甘露糖(D-mannose),核糖(D-ribose),鼠李糖(L-rhamnose),葡萄糖(D-glucose)及半乳糖(D-galactose),摩尔百分比为3.18：1.00：1.76：81.58：4.09。高效液相凝胶渗透法分析结果显示PAP-1、PAP-2的分子量分别为18WDa、15WDa。3通过DPPH自由基、ABTS自由基、超氧离子自由基、羟自由基的清除,总还原能力的测定及亚铁离子螯合作用对其体外抗氧化活性进行评价,结果显示PAP-1、PAP-2均有一定的抗氧化活性,且呈良好地剂量-效应关系。其中PAP-1、PAP-2对羟自由基、超氧阴离子的清除活性较强。4以结肠癌LoVo细胞系为例,对PAP-1、PAP-2的体外抗肿瘤活性进行评价。结果显示,PAP-1、PAP-2对LoVo细胞的生长均有一定的抑制作用,可促使LoVo细胞加速乳酸脱氢酶LDH的释放,可诱导LoVo细胞凋亡并引起LoVo细胞生长阻滞于S期,可影响LoVo细胞保内活性氧(ROS)水平,并且呈量-效关系。但诱导LoVo细胞凋亡和周期阻滞机制的尚不明确,需进一步深入研究。