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目的:脑缺血再灌注损伤的发病以及预后与脾胃元气的盛衰密切相关,因此提出调整气机为中风治疗根本,关键在于调理脾胃元气。中药荷叶具有调理脾胃,升清降浊的功效,本研究采用线栓法脑缺血再灌注损伤大鼠动物模型,选取荷叶主要提取物荷叶碱为治疗药物,探讨荷叶碱干预后,脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑水肿、缺血脑组织中RhoA/ROCKⅡ信号通路、以及血清炎症因子表达情况,为中医临床中荷叶治疗缺血性脑卒中进一步提供实验依据。方法:1.首先把SD大鼠进行随机分组,分为:假手术组(sham),模型组(I/R),法舒地尔治疗组(fasudil),荷叶碱高、中、低剂量治疗组(Nuciferine-H、NuciferineM、Nuciferine-L)6组,并进行预给药,其中假手术组和模型组给予纯净水灌胃;阳性药物组给予法舒地尔注射液腹腔注射;荷叶碱高、中、低剂量治疗组分别给予不同剂量荷叶碱灌胃。2.大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)建立。将各组大鼠进行预给药,在末次给药1 h后以线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型(MCAO),模型建立24小时后测定神经功能评分,TTC染色法检测脑梗死体积,干湿称重法检测大鼠脑含水量来评价荷叶碱预给药对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响。3.通过免疫蛋白印迹法和免疫荧光法,来观察通过荷叶碱预给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质中RhoA/RockⅡ信号通路表达的影响。4.通过ELISA法检测,来观察通过荷叶碱预给药对脑缺血再灌注损伤大鼠外周血清中IL-4、IL-10、TNF-α、IL-1β表达水平。结果:1.经过预实验,已经熟练掌握线栓法大鼠大脑中动脉栓塞脑梗死模型制作,脑缺血造模成功24小时后进行神经功能评分,假手术组中未出现神经功能缺损表现;与假手术组相比,模型组神经功能评分显著提高(P<0.05)。与模型组相比,荷叶碱高、中、低剂量治疗组和法舒地尔治疗组均可显著降低神经功能缺损评分(P<0.05)。与法舒地尔治疗组相比,荷叶碱高剂量治疗组能显著降低神经功能缺损评分水平(P<0.05)。2.脑缺血造模成功24小时后进行脑水肿检测,与假手术组相比,模型组大鼠脑含水量显著提高(P<0.05)。与模型组相比,荷叶碱高、中、低剂量治疗组和法舒地尔治疗组均可显著降低大脑含水量(P<0.05)。与法舒地尔治疗组相比,荷叶碱高剂量治疗组能显著降低大脑含水量(P<0.05)。3.TTC染色法检测脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积,该检测方法直观,有效,而且相对操作方便,大鼠脑组织切片染色后,梗死区为白色,正常脑组织为红色。脑缺血造模成功后24小时后进行TTC脑缺血检测,假手术组大鼠中未出现脑梗死表现;与假手术组相比,模型组脑梗死体积显著增多(P<0.05)。与模型组相比,荷叶碱高、中、低剂量治疗组和法舒地尔治疗组均可显著降低大鼠脑梗死体积(P<0.05)。与法舒地尔治疗组相比,荷叶碱高剂量治疗组能显著减少大鼠脑梗死体积(P<0.05)。4.Western blotting法检测各组大鼠缺血侧脑皮质部分中RhoA和RockⅡ蛋白表达水平,与假手术组比较,模型组RhoA和RockⅡ蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,法舒地尔治疗组和荷叶碱高、中、低剂量治疗组的RhoA和RockⅡ蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与法舒地尔治疗组比较,荷叶碱高剂量治疗组大鼠缺血侧脑皮质部分中RhoA和RockⅡ蛋白表达显著下调(P<0.05)。5.免疫荧光检测各组大鼠缺血侧脑皮质部分中RhoA和RockⅡ蛋白表达,与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮质部分中RhoA和ROCKⅡ表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔治疗组和荷叶碱高、中、低剂量治疗组的RhoA和RockⅡ表达水平显著下降(P<0.05)。与法舒地尔治疗组比较,荷叶碱高剂量治疗组大鼠缺血侧脑皮质部分中RhoA和RockⅡ表达水平显著下调(P<0.05)。6.ELISA法检测了脑缺血再灌注损伤大鼠血清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-4,IL-10的表达,与假手术组比较,模型组大鼠血清中IL-4、IL-10、TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,法舒地尔治疗组和荷叶碱高、中、低剂量治疗组血清IL-4、TNF-α、IL-1β水平显著降低,IL-10水平显著升高(P<0.05)。与法舒地尔治疗组比较,荷叶碱高剂量治疗组大鼠血清中IL-4、TNF-α和IL-1β水平显著降低,IL-10水平显著升高(P<0.05)。结论:1.采用线栓法进行大鼠大脑中动脉栓塞造模,梗死区域稳定,手术效果好,大鼠存活率高。2.荷叶提取物荷叶碱预处理脑缺血再灌注损伤大鼠,可以改善脑梗死大鼠神经功能评分、减轻脑梗死体积、改善脑梗死大鼠脑水肿情况,起到神经保护作用。3.荷叶提取物荷叶碱预处理脑缺血再灌注损伤大鼠,可以下调缺血脑组织中RhoA/ROCKⅡ信号通路表达,促进神经恢复。4.荷叶提取物荷叶碱预处理脑缺血再灌注损伤大鼠,可以调节外周血清中IL-4、IL-10、TNF-α、IL-1β表达水平,抑制脑缺血发生后炎症反应,减轻炎性损伤作用。