斜纹夜蛾固醇转运蛋白基因Slxcpx的表达调控分析

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昆虫蜕皮与变态发育受蜕皮激素(20E)和保幼激素(JH)调控。蜕皮激素合成的主要场所是前胸腺。胆固醇在昆虫体内的一个生理作用是在前胸腺中合成蜕皮激素。由于昆虫体内缺少合成胆固醇的两种关键合成酶,所以昆虫不能自主地从简单化合物从头合成胆固醇,必须依赖从食物中摄取胆固醇以满足生长、发育和繁殖的需要。斜纹夜蛾固醇转运蛋白(SCPx)是参与固醇类物质吸收,转运和代谢的一个重要蛋白。前期研究发现,Slscpx是斜纹夜蛾中肠专一表达的基因,对胆固醇的吸收和幼虫的生长发育起着重要的作用。   本研究利用EIA技术分析了斜纹夜蛾6龄幼虫发育期间血淋巴中20E水平,发现存在2个峰值,分别位于6龄第2天和第4天,含量分别达到750 nM和2250 nM。RT—PCR分析发现,Slscpx、Slscpx-2和Slscpx-t mRNA在幼虫前胸腺6龄进食期(H36-H72)的转录水平相对其他时期较低,在6龄初期(H36)前和预蛹期(H96)后有高水平表达,与幼虫6龄发育期间血淋巴中蜕皮激素水平的变化一致。HPLC分析结果发现,AeSCP-2抑制剂SCPI-1和SCPI-2能显著下调斜纹夜蛾幼虫血淋巴中胆固醇的含量,并且这两种抑制剂的作用效果相似,可以减少血淋巴中50%的胆固醇积累(P<0.001)。研究还发现,SCPI-2可抑制前胸腺蜕皮激素的分泌(P<0.001)。Slscpx基因的表达受胆固醇调节。高浓度的外源胆固醇可以诱导斜纹夜蛾胚胎细胞株Spli-221和离体培养的前胸腺中Slscpx基因的表达,并可显著促进前胸腺分泌蜕皮激素。体外注射20E和JHⅢ的实验结果表明,Slscpx、Slscpx-2和Slscpx-t mRNA的表达在中肠、表皮和脂肪体中对20E和JHⅢ的响应明显不同,显示该基因在这些组织中具有不同的mRNA的表达调控或剪切机制。   所有结果表明,SISCPx基因参与了前胸腺中胆固醇的运输,从而促进蜕皮激素的分泌或合成。
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