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背景:前列腺癌的发病率及致死率逐年升高,雄激素剥夺疗法（Androgen Deprivation Therapy,ADT）是前列腺癌的常见疗法之一,ADT虽有一定疗效,但是病情在短暂控制后常会发生恶化,并逐步演变为去势抵抗性前列腺癌（Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC）。研究表明在ADT治疗后肾上腺雄激素—硫酸脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEAS）由有机阴离子转运多肽2B1（Organic Anion Transporting Polypeptides 2B1,OATP2B1）转运进入癌细胞内转化为强效雄激素二氢睾酮,进一步激活雄激素受体（Androgen receptor,AR）并促进增殖,产生去势抵抗。许多中药活性组分如18β-甘草次酸（18β-Glycyrrhizic acid,18β-GA）等能抑制OATP2B1的转运功能。恩杂鲁胺（Enzalutamide,ENZ）是一种AR拮抗剂,能阻断雄激素与AR结合,但部分患者最终在ENZ治疗过程中产生耐药性。因此,研究中药活性组分18β-GA阻断OATP2B1摄取DHEAS这一途径减少雄激素生成,并与雄激素受体抑制剂ENZ协同延缓肿瘤进展,将为CRPC的防治提供新方法、新思路。目的:研究18β-GA通过抑制OATP2B1摄取DHEAS减少细胞内雄激素生成进而与雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制,为CRPC的防治探寻新方法、新策略。方法:1、使用RT-q PCR和Western blotting技术研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌LNCap和22RV1细胞中转运体OATP2B1的表达情况,细胞毒性实验和克隆形成实验探究DHEAS对细胞增殖情况的影响。2、利用三重四极杆串联质谱技术（LC-MS/MS）,建立HEK293细胞中DHEAS浓度的检测方法。3、使用LC-MS/MS分析方法研究OATP2B1-HEK293细胞模型中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用及其抑制模式。4、使用LC-MS/MS分析方法研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌22RV1细胞中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用,使用Western blotting实验、细胞毒性实验、克隆形成实验、Transwell及划痕实验、TUNEL实验验证18β-GA联合雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗肿瘤细胞的生物学活性作用。5、使用裸鼠异种移植模型,考察去势条件下18β-GA对体内肿瘤细胞摄取DHEAS的影响,通过生化指标检测、苏木精-伊红染色、免疫组化等方法揭示18β-GA基于OATP2B1介导DHEAS摄取抑制与ENZ协同抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制。结果:1、在雄激素剥夺培养条件下,LNCap和22RV1细胞中OATP2B1的m RNA水平分别上调458.74%和108.48%,蛋白水平分别上调89.51%和68.89%。DHEAS会促进细胞的增殖,与正常组相比,LNCap和22RV1细胞组的细胞活力分别增加了21.78%和20.79%。2、本实验建立的检测DHEAS浓度的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、稳定、可靠,其特异性、线性范围、提取回收率、基质效应、批内批间精密度和准确度均符合相应接受标准。3、在OATP2B1-HEK293细胞中,环孢菌素A（OATP2B1的经典抑制剂）可明显抑制DHEAS的摄取转运,进一步证明DHEAS是OATP2B1的底物,其摄取动力学参数Km（μM）为10.393±2.33,Vmax（pmol/mg protein/min）为24.25±2.03。18β-GA显著抑制OATP2B1对DHEAS的摄取,其IC50值为3.51±1.19μM。在系列浓度DHEAS的基础上外加18β-GA（100μM）后,发现DHEAS的摄取动力学参数Vmax值明显减小（从44.82±1.28减少至34.87±0.74 pmol/mg protein/min）,但是Km值几乎不变,提示18β-GA可能是通过非竞争性抑制模式,对OATP2B1摄取DHEAS产生抑制。4、在雄激素剥夺培养条件下,DHEAS（10μM）会促进前列腺癌细胞22RV1增殖,18β-GA（40μM）可对抗DHEAS引起的细胞增殖效应。18β-GA联用ENZ可协同对去势抵抗前列腺癌,在增殖、迁移、凋亡方面都表现出一定的协同对抗作用。5、在异种移植裸鼠体内,去势条件下腹腔注射DHEAS可促进肿瘤的生长,在给DHEAS的基础上,18β-GA可抵消其促进作用;18β-GA和ENZ联用可以显著抑制肿瘤生长,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。结论:1、18β-GA能明显抑制OATP2B1介导的DHEAS摄取转运,是OATP2B1的抑制剂,在去势抵抗前列腺癌中可能发生基于OATP2B1介导的相互作用。2、18β-GA抑制DHEAS经OATP2B1的摄取转运,进而减少雄激素的生成,18β-GA与雄激素受体拮抗剂ENZ联用通过减少配体的生成和抑制雄激素受体共同抵抗去势抵抗前列腺癌进展。