固态发酵棕榈粕最佳工艺参数的研究

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本试验从棕榈粕堆和腐叶垛土中提取、筛选出高效降解纤维素菌株,并与酿酒酵母和枯草芽孢杆菌配伍,研究了固态发酵棕榈粕的最优工艺参数。主要研究结果如下:试验1:从棕榈粕堆和腐叶垛土中富集筛选分离纯化得到菌株47株,经水解圈大小比较法进行了纤维素降解能力的初筛,选定降解能力较强的菌株11株,并进一步比较纤维素酶活力进行复筛,最终筛选出2株产酶能力较强的真菌菌株F1和F2,滤纸酶活力(FPU)分别为5.47IU/mL和10.59IU/mL,外切葡聚糖酶活力(Cx)分别为7.42IU/mL和10.08IU/mL。对这两株菌株进行菌落形态学观察鉴定,初步判断F1菌株为米曲霉,F2菌株为黑曲霉。试验2:以棕榈粕为底物,麸皮为辅料,将F1和F2菌株与酿酒酵母和枯草芽孢杆菌设置不同配伍组合处理固态发酵棕榈粕,以发酵前后培养基粗蛋白质含量变化为评价指标,进行固态发酵棕榈粕最佳菌种组合、菌种最优比例和最佳接种量的研究。固态发酵棕榈粕的最佳菌种组合为“F2+酿酒酵母”,最优比例为1:1,最佳接种量为8%,此处理组发酵产物中粗蛋白质含量较发酵前提高了7.21%。试验3:分别设定培养基中辅料(麸皮)含量为10%、15%、20%、25%和30%,氮源(硫酸铵)添加量为1%、2%、3%、4%、5%和6%,通过单因素试验确定麸皮添加量在20%,硫酸铵添加量为4%时,固态发酵棕榈粕效果最佳,发酵后产物中粗蛋白质含量较发酵前提高了9.45%。试验4:在前期试验基础上,进一步探讨补水量、发酵温度和时间等关键因子对发酵产物粗蛋白质含量的影响,响应面法分析结果表明,棕榈粕固态发酵最佳工艺参数为:补水量(A)1.48ml/g,发酵温度(B)为35.04℃、发酵时间(C)7.34d,此时发酵产物理论粗蛋白质含量为30.88%(粗蛋白质含量=30.688-0.3525A+0.00875B+0.61375C+0.02AB-0.12AC-0.2075BC-0.41275A2-0.77025B2-1.00025C2),而实测含量为30.34%,符合预期;在上述所得的最佳工艺参数条件下,进一步研究显示培养基在不灭菌条件下的发酵产物粗蛋白质含量高达33.49%,显著高于灭菌条件下的30.34%(P<0.05);此时,产物中粗蛋白质含量较发酵前的21.17%提高了58.20%,其中精氨酸含量从发酵前的0.24%增加到1.10%,增幅达366.20%,赖氨酸的含量从发酵前的0.57%增加到发酵后的1.15%,提升了103.53%;粗脂肪含量从发酵前的11.28%降低到4.82%,降低了52.27%,中性洗涤纤维含量从67.67%降低到58.87%,降低了13.00%,半纤维素含量从33.82%降低到25.48%,降低了24.66%,差异显著(P<0.05)。试验5:在培养基中添加不同含量的外源复合酶制剂(复合酶制剂中甘露聚糖酶、纤维素酶和木聚糖酶配伍比例为:1:9:90)以最佳发酵工艺发酵棕榈粕后,产物中的粗蛋白质含量和中性洗涤纤维含量分别呈现下降和上升的趋势,其中,添加低剂量的酶(<20mg/g)对粗蛋白质和中性洗涤纤维的含量并无显著影响,而高剂量的酶(>20mg/g)添加对其影响显著,这表明在本发酵工艺条件下,为达到固态发酵棕榈粕最佳发酵效果,不宜在培养基中添加此复合酶。实验摇瓶条件下对固态发酵棕榈粕的相关工艺参数研究表明,最佳的生产工艺参数为:F2菌株+酿酒酵母,最适配比1:1,最佳接种量8%,麸皮添加量20%,硫酸铵添加量4%,最佳补水量、发酵温度和发酵时间分别为1.48mL/g、35.04℃和7.34d,不灭菌。对比最佳工艺条件下发酵前后培养基的营养组成变化可知,固态发酵能够显著改善棕榈粕的营养价值。
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