前言 铅是人类广泛接触的有毒重金属之一，对机体的几乎所有组织器官都可造成损害。乙醇是常用的有机溶剂及酒类饮料的主要成份，乙醇对机体多个系统都有影响。铅与乙醇均是接触频率高，暴露人群广泛的化学物质。在铅作业工人、尤其是青年工人中多有嗜酒行为，有人在对铅接触者的调查中发现90％的男性工人有饮酒习惯。乙醇可促进骨骼中铅的释放，使中毒症状明显加重。饮酒者发生铅中毒的比例较高。因此，研究铅和乙醇的联合毒作用具有重要的理论和实际意义。 近年来，关于铅和乙醇对全身各系统的联合作用的研究逐渐深入，对于不同的组织器官，铅和乙醇的联合作用类型不尽相同，有的表现为拮抗作用，更多的表现为协同作用。虽然目前关于铅和乙醇联合毒作用的报道较多，但对免疫系统影响的研究还很少，尤其是对整体动物的研究更为少见。免疫系统是维护机体健康、正常执行生理生化功能的重要保证，也是化学毒物经常攻击的靶组织。为了阐明铅与乙醇联合作用对雄性小鼠免疫系统的影响，本课题拟用体内、体外实验的方法，观察铅和乙醇对小鼠免疫功能的联合作用并初步探讨其作用机理，为保护接触者的健康，进行有效防治提供理论依据。 实验材料与方法 1．实验动物分组与染毒 昆明种小鼠，雄性，体重22±2g，小鼠饲养1w后按体重随机分为4组，每组10只；动物室温度18-23℃，相对湿度45-55％，自由饮水摄食。以醋酸铅和乙醇为受试物，分别按以下剂量染毒，将小鼠按0.1ml/10gbw醋酸铅和乙醇灌胃，每天1次，连续4w。分别为： 对照组：蒸馏水灌胃； 醋酸铅组：醋酸铅水溶液灌胃，250mg／kgbw； 乙醇组：乙醇灌胃，3.16g／kgbw； 联合作用组:用25Om扩kg醋酸铅+3 .16扩kg乙醇组灌胃。 2.观察指标及检测方法 2.1一般指标:体重、脾重、胸腺重并计算脏器系数 2.ZT淋巴细胞增殖功能测定:C。认刺激淋巴细胞转化试验(M竹法) 2.3抗体生成细胞检测:定量溶血分光光度测定法(QHS法) 2.4试管凝集试验 2.5巨噬细胞功能检测 2.5.1大鼠腹腔灌洗液巨噬细胞(PM)数计数 2.5.2大鼠腹腔灌洗液巨噬细胞吞噬功能测定:中性红比色法 2 .6脾脏组织病理学检测 2.6.1光镜观察:脾脏经10%福尔马林固定，常规制片，HE染色，光镜下观察; 2.6.2电镜观察:脾脏经2.5%戊二醛固定，树脂包埋，超薄切片，醋酸铀及柠檬酸铅染色，透射电镜下观察超微结构的改变。 3.数据处理 采用SPsS统计软件进行统计学分析，实验数据用又土s表示，各指标比较，用单因素方差分析，随后采用LSD法进行两两比较。实验结果 1.各组小鼠体重、脾重、胸腺重及脏器系数 各染毒组体重均较对照组低，但铅组、乙醇组与联合作用组之间没有差别;各染毒组之间脾的绝对重量及相对重量都无差异。各染毒组胸腺重均较对照组低，且铅组和联合组的胸腺绝对重量与对照组相比有差异，但各染毒组脏器系数与对照组相比无差异。 2.铅和乙醇对小鼠细胞免疫的影响 各染毒组的细胞增殖功能都显著下降，而联合作用组的增殖功能与铅组和乙醇组相比下降更明显。 3.铅和乙醇对小鼠体液免疫的影响 染铅组和联合作用组的分泌抗体功能显著下降，乙醇组的分泌抗体功能下降不明显，而联合作用组较乙醇组下降明显;试管凝集试验中，各染毒组抗体水平都下降，但各染毒组之间无差别。 4.铅和乙醇对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 各染毒组巨噬细胞数与对照组相比没有差别;但铅组与乙醇组的吞噬功能明显降低，而联合作用组较铅组与乙醇组又升高，且与乙醇组有显著性差异。 5.脾脏组织病理学改变 5.1光镜下改变 对照组细胞分布均匀，结构正常。染铅组小鼠脾脏淋巴组织减少，融合细胞较多;染乙醇组小鼠脾脏淋巴组织减少，可见细胞溶解;联合组小鼠脾脏淋巴组织减少，细胞溶解更明显。 5.2电镜下改变 对照组琳巴细胞边界清楚，核、线粒体及内质网均正常。染铅组小鼠淋巴细胞核间隙增宽，出现核固缩、核碎裂，线粒体严重空泡变性;染乙醇组小鼠脾脏淋巴细胞大量核固缩、核碎裂，偶见细胞坏死，线粒体严重空泡变性，内质网扩张，有空泡形成;联合组小鼠脾脏淋巴细胞出现核固缩、核碎裂，线粒体空泡变性等异常表现，较铅组和乙醇组更为明显。讨论 动物的体重变化，可以反映动物中毒后机体综合性改变，是一个客观简便的量化指标。在本实验中，各染毒组体重均较对照组明显降低，说明铅和乙醇对小鼠产生了毒作用。脾和胸腺是免疫系统比较重要的器官，本实验中各染毒组胸腺重均较对照组低，且铅组和联合组的绝对重量与对照组相比有差异，而脏器系数各组之间无差异，说明铅和乙醇对胸腺可能没有影响，而胸腺重量的降低可能是由于小鼠体重的降低所致。本实验中脾的绝对重量、脏器系数各染毒组之间无差异，这可能与免疫抑制有关。 免疫系统是维护机体健康、正常执行生理生化功能的重要保证，也是化学毒物经常攻