番茄NAC转录因子SlNAC11的克隆及功能研究

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NAC(矮牵牛NAM,拟南芥ATAF1/2和CUC1/2)转录因子是近年来发现的具有多种生物学功能的植物特异性转录因子。该家族蛋白所具有的共同特点是N末端都拥有高度保守的DNA结合区域(约150个AA)和C末端高度变异的转录调控区。作为植物特异的转录因子家族之一,NAC结构域蛋白在植物生长发育,叶片衰老,顶端分生组织的发育,花发育,植物激素信号调控,次生壁的形成以及抵抗逆境等方面都发挥着重要作用。本研究中,我们以番茄AC++为研究主体,对NAC家族的新成员NAC11进行了研究,主要研究内容及结果如下:(1)从番茄中克隆得到目的基因,并将其命名为Sl NAC11,其c DNA编码一条350个氨基酸的肽链。该基因的氨基酸序列和已知NAC家族蛋白比对发现,同其他已知蛋白一样,该蛋白N末端结构域可以被分为A-E五个亚区域,且在C和D区域高度保守;系统发育树分析表明,Sl NAC11和RD26及Os NAC6较为相似,初步断定该目的基因可能属于ATAF1亚家族,主要参与胁迫响应;(2)Sl NAC11基因在番茄中的组织表达模式研究表明,该基因在番茄幼叶、成熟叶和衰老叶片中的表达量呈下降趋势,且在幼叶中表达量最高,说明该基因可能参与叶片的发育调控及对外界环境的响应;(3)根据RNAi实验原理及方法,我们构建了Sl NAC11基因的RNAi载体Sl NAC11-RNAi,转化番茄AC++,并获得转基因株系,为进一步研究Sl NAC11基因的功能奠定了基础;(4)多种外源激素(ABA、ACC、Me JA、GA3和IAA)处理野生型番茄AC++幼苗,经q RT-PCR分析,结果表明Sl NAC11的表达受外源激素ABA、Me JA和GA3的诱导,暗示该基因可能参与这些激素的调控过程;(5)非生物胁迫(低温、高温、脱水和盐)处理野生型番茄AC++幼苗,q RT-PCR结果表明,Sl NAC11的表达受高/低温和脱水处理的强烈诱导,受盐处理的微弱诱导,说明Sl NAC11基因可能参与这些非生物胁迫响应;(6)转基因T1代种子萌发的盐敏感性及转基因幼苗ABA敏感性实验表明,Sl NAC11基因沉默导致番茄种子萌发对盐环境更加敏感,对盐的耐受力降低,致使种子萌发率较野生型低,然而转基因幼苗对盐的灵敏性和野生型无明显差异;转基因幼苗对外源ABA的敏感性降低,说明该基因可能是依赖于ABA途径的胁迫响应因子;(7)T1代转基因阳性株系干旱胁迫处理结果及相关生理指标检测结果显示,Sl NAC11基因沉默导致番茄对干旱环境的耐受能力降低。综上所述,经生物信息学分析可知,Sl NAC11基因是ATAF亚家族的成员;定量PCR检测激素和非生物胁迫处理下Sl NAC11表达量变化情况显示,该基因受ABA,Me JA和外界环境等因素处理的诱导;转基因T1代相关实验结果表明,番茄中沉默Sl NAC11基因的表达导致(1)转基因番茄T1代种子萌发过程中对盐胁迫的的敏感性增加,然而幼苗的敏感性却无显著变化,(2)阳性转基因T1代幼苗对ABA的敏感性降低,(3)阳性转基因T1代幼苗的耐旱能力降低。
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