论文部分内容阅读
禽(番鸭)呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, DRV)是新近发现的番鸭“肝白点病或花肝病”的病原。该病的主要临床特征是精神萎顿、软脚、排绿色带有粘液稀粪、部分病鸭趾关节或跗关节有不同程度的肿胀及耐过鸭生长发育受阻;主要病理变化为肝、脾表面有多量小白点、肾脏肿大、出血、表面有黄色条斑。在患病番鸭中,雏番鸭最为易感,死亡率很高。禽源呼肠孤病毒(Avianreovirus, ARV)经常以抗原亚型存在,不易确定独立的血清型。病毒基因组中的4个小基因节段(S1、S2、S3和S4)是研究ARV遗传演化的关键,已发现ARV分离株S组基因具有两种基因型:一种基因型的代表株为DRV-89026和DRV-89330,另一种基因型的代表株为ARV-S1133。本实验室从番鸭“肝白点病”患鸭的肝脾匀浆中分离到7个病毒分离株,通过病毒病的常规实验诊断证实均为DRV。为了进一步了解DRV福建分离株的遗传演化关系,本研究选取番鸭源原代株YB和克隆株YJL、传代株YH进行病毒4个小基因节段(S组)基因节段序列测定与分析。 本研究从GeneBank中读取法国分离株DRV-89026和DRV-89330,美国分离株ARV-S1133和176的S组全基因序列设计两套PCR引物,利用番鸭胚成纤维细胞增殖番鸭源呼肠孤病毒,提取病毒基因组RNA,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)对这三株病毒4个基因节段进行扩增,其产物克隆进入pMD18-T载体后,在CEQ8000测序仪上进行序列测定,成功获得YJL和YB的S组全基因序列,YH的S1和S3基因序列。结果表明克隆测定的基因节段均包含完整的开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。原代株YBS1、S2、S3和S4基因大小分别为1324bp、1201bp、1191bp和1191bp,克隆株YJL的S1、S2、S3和S4基因大小分别为1643bp、1324bp、1179bp和1192bp,传代株YH的S1和S3基因大小分别为1643bp和1179bp。另外,这三株病毒S组基因系统发生树表明,DRV-YH与YJL同为一个亚系,但与DRV-YB亲源关系较远,分属不同的进化分支。