背景与目的:　　良性前列腺增生(benignprostatehyperplasia,BPH)是中老年男性常见的多发疾病,通常在40岁以后开始发生,发病率随年龄增加而递增。腺体的进行性肿大会引起下尿路症状(lowerurinarytractsymptoms,LUTS)的产生,临床上表现为:尿频、尿急、尿潴留等梗阻症状,严重影响了患者的健康和生活质量。轻、中度BPH症状的患者大多选择药物治疗为主要治疗方式,目前国内外用于治疗良性前列腺增生的药物主要有α1受体拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素药物、中药和植物制剂4种。α1肾上腺素受体(α1-adrenoceptor,α1-AR)拮抗剂是目前临床上使用较多的一线药物。病理研究表明,BPH增生的间质富含α1A亚型受体,BPH引发的LUTS与分布在前列腺、膀胱及尿道近端α1A和α1D亚型受体有关,因此特异性拮抗α1A/1D亚型可达到减轻前列腺间质中平滑肌和膀胱括约肌的收缩程度,减缓BPH症状,改善LUTS。大量的实验证实传统的α1受体拮抗剂如哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪不具有α1亚型选择性,对α1B亚型产生同等程度的拮抗作用,是这类药物产生体位性低血压、疲惫、困倦等副作用的主要原因。因此,开发具有高尿路选择性的α1A/1D亚型选择性拮抗剂,已成为研发高效低副作用BPH药物的研究热点。　　消旋体YM01是已知α1A/1D选择性的受体拮抗剂,在临床上广泛用于治疗BPH引起的下尿路症状,本人所在课题组在国内首次合成YM01及其对映异构体。目前尚未有关于单体的药理活性报道,鉴于手性药物对映体间药理学上的差别,有必要对单体的药理活性展开研究。　　本人所在课题组前期以芳基哌嗪为基本骨架,合成了多个系列的α1受体拮抗剂,并通过细胞分子水平的药物筛选模型筛选出部分对α1A/1D有较高选择性的拮抗剂。本研究对其中的7个高α1A/1D选择性的α1受体拮抗剂,进行组织选择性和亚型选择性的研究;研究的第二部分通过激素联用法诱导大鼠良性前列腺增生模型,对YM01对映异构体(R/S-YM01)和消旋体YM01的治疗作用,及手性药理学差异进行研究。　　内容和方法：　　1.离体组织生物功能性测试实验:实验选用富含α1-AR三种亚型的大鼠离体组织:胸主动脉(α1D)、脾(α1B)、输精管(α1A)进行离体灌流实验。通过去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)刺激上述组织中α1-AR亚型,引起组织收缩,加入7个受试化合物后与初始值进行比较,并以百分率表示。记录加入各种剂量的受试化合物之前和之后的全NA量效曲线,进行强度分析。量效曲线平行向右移动,证明是竞争性拮抗作用,通过Prism5.0软件得出各NA量效曲线的EC50,根据Schild法计算拮抗参数(pA2)值,对7个受试化合物的药理活性、组织选择性和亚型选择性进行评价,验证前期放射配体结合实验和分子高通筛选工作的结果,为化合物是否值得进一步深入研究提供依据。　　2.YM01对映异构体对BPH病理模型脏器重量及指数的影响:建立应用激素联合诱导SD大鼠良性前列腺增生的模型,设立假手术组和模型组灌予生理盐水作对照,通过该模型考察α1受体拮抗剂YM01,连续灌胃给予B-YM01(3.56mg/kg、11.86mg/kg、35.58mg/kg),A-YM01(3.56mg/kg、11.86mg/kg、35.58mg/kg)和R,S-YM01(11.86mg/kg)4周后,处死动物,称量前列腺组织湿重、测量体积以及计算指数。　　3.YM01对映异构体对BPH病理模型病理形态组织的影响:各组大鼠的前列腺组织取前叶和后侧腹叶制成病理切片,分别进行HE染色以观察组织形态变化、进行免疫组化定量以考察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达率,采用ProPlus6.0图像分析系统进行组织形态计量分析。　　研究结果：　　1.7个受试化合物对胸主动脉(α1D)和输精管(α1A)的pA2值均大于7,尤其是HJ05对α1D的pA2值最大为8.44;各受试化合物对脾(α1B)的pA2值相对较小;而阳性对照特拉唑嗪则对各组织的pA2值大小相近。比较各受试化合物对上述组织作用的pA2值,其中A-YM01、B-YM01、R,S-YM01、B-J04、HJ05对α1D的作用是对α1B的作用大于10倍,尤其是HJ05对α1D的作用是α1B的26倍,B-YM01对α1D的作用是α1B的22倍,而各受试化合对α1A的作用均小于α1D五分之一倍。结果证实受试化合物均为选择性α1A1/1D亚型化合物。　　2.模型组大鼠前列腺湿重、湿重指数、体积、体积指数、膀胱重量等直观指标与假手术组相比,均明显增大(P<0.01)。与模型组相比,A-YM01与B-YM01两对映异构体各剂量组对大鼠前列腺的直观指标均有不同程度的减少(P<0.05~0.01),而且B-YM01各剂量组对前列腺增生的抑制作用优于A-YM01相应剂量组。　　3.假手术组大鼠前列腺的腺腔大小不一,且部分腺体有皱襞形成,腺上皮细胞呈单层柱状或假复层柱状排列,腺体外周有结缔组织包围;与之相比,模型组腺腔明显扩张(P<0.01),腺体周围结缔组织增生,腺上皮细胞明显增厚(P<0.01),且通过检测上皮细胞和间质细胞的PCNA表达以及α-SMA表达,模型组均明显增加(P<0.01)。通过形态计量分析,与模型组相比,A-YM01和B-YM01各剂量组对前列腺的腺腔、腺上皮以及间质均有影响。A-YM01对于腺腔周长以及腺腔相对体积的抑制作用优于B-YM01,然而B-YM01对间质相对体积以及腺上皮相对体积的抑制作用则优于A-YM01。A-YM01与B-YM01均有PCNA以及α-SMA的表达有抑制作用,但B-YM01的抑制作用强于A-YM01。　　结论:　　1.7个受试化合物均对α1A和α1D受体有较高选择性,并具有组织选择性,以HJ05的选择性和活性最好,它们的选择性均优于阳性对照药特拉唑嗪。　　2.A-YM01和B-YM01对雌雄激素诱导的大鼠BPH模型,均有抑制前列腺湿重增生和体积增生的作用,而且对前列腺的增生程度来说,B-YM01的抑制作用更佳。　　3.从病理组织形态角度考察A-YM01和B-YM01对增生前列腺的抑制作用,结果表明两者均有抑制作用,且B-YM01的抗前列腺增生作用优于同等剂量的A-YM01。