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目的: 本实验通过研究益气补肾方对糖尿病脑缺血再灌注大鼠模型肾脏损伤的保护作用,探讨本方对肾脏损伤时肾组织中AGEs及RAGE表达的影响,及其对AGEs-RAGE通路的影响,来证实益气补肾方对治疗糖尿病及其并发症的积极作用,为其临床应用提供实验及理论依据。 方法: 健康SPF级雄性Wistar大鼠,体重200g左右,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、中药低剂量组及中药高剂量组。模型对照组及中药高、低剂量组禁食12小时后按体重60mg/kg一次性腹腔注射1%STZ溶液,正常对照组腹腔注射等剂量缓冲液。腹腔注射结束后,正常饲养,10天后采用断尾取血方法测量大鼠血糖,将2次随机血糖≥16.7mmol/L者确定成功建立糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠成功模型采用改良Zea-Longa法建立大鼠大脑中动脉局灶性缺血模型。参考Longa及Beders on的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分。评分1-3分视为造模成功。中药低剂量组以益气补肾方按200mg/kg*d的剂量灌胃,中药高剂量组按800mg/kg*d剂量灌胃,正常对照组及模型对照组分别给予生理盐水10ml/kg*d灌胃,连续灌胃8周。实验期间,按时称重、测量末梢血糖,并观察各组大鼠皮毛色泽、饮食、大小便、生活状态等基本情况。第8周末收集尿液及血液样本,取肾组织,进行石蜡切片、HE染色、Masson染色、PAS染色、免疫组化及RT-PCR实验。 结果: 1、一般状态:模型对照组大鼠出现明显的多饮、多食、多尿、体重减轻等糖尿病典型临床表现,毛色灰暗粗糙,黯淡无光,并伴有精神萎靡,反应迟钝,不能自主行走甚至意识丧失等脑卒中表现。中药低剂量组、中药高剂量组大鼠也出现类似表现,但较模型对照组有不同程度的减轻。 2、常规指标:与正常对照组相比较,其余3组大鼠U-mAlb、血清BUN的含量均明显升高(P<0.05),模型对照组升高最为明显;与模型对照组相比较,中药各治疗组大鼠U-mAlb、血清BUN的含量均明显降低(P<0.05);与中药低剂量组相比较,中药高剂量组U-mAlb、血清BUN的含量明显降低,但无显著统计学差异(P>0.05)。 3、肾组织染色:HE、Masson及PAS染色可见模型对照组大鼠出现肾小球硬化,系膜区扩大,系膜细胞数目增多,系膜基质弥漫性增生及结节,基底膜增厚,肾小管及肾间质纤维化,肾小管基底膜增厚,肾细小动脉玻璃样变等病理改变。中药低剂量组、中药高剂量组大鼠肾脏病理性改变较模型对照组有不同程度的减轻,其中中药高剂量组减轻更为明显。 4、免疫组化:正常对照组大鼠肾脏组织肾小球有极少量的AGEs表达,模型对照组肾小球中AGEs表达呈强阳性(P<0.05),与模型组相比,中药低剂量组大鼠肾脏AGEs的表达减轻的不明显(P>0.05),而中药高剂量组有显著的减轻(P<0.05),其AGEs的表达与正常对照组相近(P>0.05)。 5、RT-PCR结果:模型对照组的AGEs及其下游产物RAGEs的mRNA表达量明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,中药低剂量组的AGEs及其下游产物RAGEs的mRNA表达量降低,但是不显著(P>0.05),中药高剂量组的AGEs及其下游产物RAGEs的mRNA表达量明显降低(P<0.05)。 结论: 1、益气补肾方能改善糖尿病脑缺血再灌注大鼠一般状态,减少尿白蛋白排泄,减轻肾组织肾小球肥大、硬化、系膜增生及基膜增厚等结构病变,起到保护肾脏的作用。 2、本实验结果显示,通过益气补肾方中药干预,肾脏组织中AGEs和RAGE mRNA表达明显下调,免疫组化中AGEs阳性产物明显减少,从而推测益气补肾方可以通过干预AGEs和RAGE的表达,以抑制AGEs-RAGE通路的激活,改善糖尿病脑缺血再灌注模型肾脏的损伤,延缓其病情进展。