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研究背景宫颈癌是继乳腺癌、胆管癌之后世界第三大女性恶性肿瘤,2008年总发病例和死亡病例分别为529800、27500例,占肿瘤总发病例和总死亡病例的9%、8%,而其中85%的病例发生在发展中国家。在世界范围内尽管宫颈细胞学筛查已经显著降低了宫颈癌的发病率和死亡率,但在发展中国家宫颈癌仍是主要的肿瘤死亡原因。即使在发达国家宫颈癌相关的费用仍然是一笔巨大财政支出。为了改善宫颈癌的预后及研究新的宫颈癌治疗策略,我们应该对宫颈癌肿瘤形成的分子生物学机制做深入研究。特殊类型的HPV感染是宫颈癌的主要致病因素,有研究发现HPV阳性宫颈癌组织中多伴EZH2蛋白高表达。EZH2属于PcG (Polycomb Group)基因家族核心成员,是多硫抑制复合物2(PRC2)的催化亚基。除了EZH2蛋白,多硫抑制复合物2由另外的EED、SUZ12蛋白等组成,通过对核小体的共价修饰和染色质的重构发挥转录调节作用。EZH2蛋白介导的组蛋白甲基转移酶使靶基因组蛋白氨基末端赖氨酸甲基化,因而发生表观遗传学的改变导致靶基因转录抑制,从而调节细胞的增殖。在多种恶性肿瘤均发现EZH2表达升高,例如胃癌、胆囊癌、膀胱癌、卵巢癌等,是重要的预后影响因子。目的探究EZH2在宫颈癌组织中的表达及EZH2在宫颈癌细胞增殖中的作用机制。方法采用免疫组化法分别检测20例正常宫颈组织、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)、101例宫颈癌中EZH2、Ki-67蛋白的表达,并对EZH2与10-67、临床病理特征及预后的相关性进行探讨;应用siRNA干扰技术沉默EZH2表达,然后通过MTT法检测沉默EZH2基因对宫颈癌增殖的影响,用实时定量PCR法检测沉默EZH2基因后相关基因表达的变化并通过蛋白免疫印迹法进一步验证。结果:1.EZH2在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌中表达逐渐升高。EZH2在正常宫颈组织中表达较低,其阳性率为10%(2/20);CIN组织中EZH2表达阳性率为60%(12/20),较正常宫颈组显著升高,且两组差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌中EZH2阳性率为68.3%(69/101),明显高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P<0.05),较CIN组阳性率升高,差异无统计学意义(P=0.470)。2.Ki-67在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌中表达逐渐升高,阳性率依次为5%(1/20)、50%(10/20)、57.4%(58/101),且在宫颈癌中EZH2和Ki-67的表达呈显著正相关(r=0.440,P<0.05)。3.EZH2的表达与宫颈癌组织病理分级、FIGO临床分期、浸润深度、淋巴结转移密切相关;而与患者年龄、肿瘤直径、组织学类型无明显相关性。4.Kaplan-Meier法分析显示:EZH2阴性组平均生存时间53.3个月,优于阳性组平均生存时间42.3个月,其两组间差异有统计学意义(P=0.003,log-rank test)。Cox比例风险模型分析发现EZH2与病理类型、淋巴结转移同为宫颈癌的独立预后因素。5.在转染EZH2-siRNA后48小时对细胞增殖的影响最明显,沉默EZH2基因可明显抑制CaSki细胞的生长。6.应用实时荧光定量PCR技术检测显示:EZH2-siRNA可显著抑制EZH2表达并促进P57基因的转录;用蛋白免疫印迹法进一步验证EZH2对P57的影响,我们发现EZH2-siRNA可显著抑制EZH2蛋白的表达、促进P57蛋白的表达。结论在宫颈癌中EZH2高表达且与肿瘤分化程度、临床分期、间质浸润深度、淋巴结转移及临床预后密切相关,其高表达常伴随肿瘤细胞较强的生长增殖能力,而干扰EZH2表达可使抑癌基因P57脱抑制进而影响肿瘤细胞生长。EZH2可作为宫颈癌基因治疗的靶向位点,亦可作为一种新的肿瘤标记物用于宫颈癌的辅助诊断。