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目的研究经糖皮质激素处理的骨微循环内皮细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)代谢过程的变化情况,以及维生素C对该过程的影响。骨坏死周围组织中ROS及线粒体DNA (mtDNA)的突变情况。方法应用经关节置换术切除的无疾病的股骨颈骨折患者的新鲜股骨头标本,取出股骨头内的松质骨,采用酶消化法,分离并培养股骨头内微循环内皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。取第3代细胞,分别加入含不同浓度(Omg/ml、0.03mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml、1.0mg/ml)氢化可的松的M199培养基,采用MTT方法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪观测细胞凋亡率；使用荧光探针检测细胞中活性氧浓度的变化；以及与活性氧代谢相关酶黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)的活性变化；培养基中加入维生素C(0.1mg/m1)进行干预,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,并检测细胞中活性氧浓度的变化。观察骨坏死周围组织中ROS浓度,使用PCR法扩增mtDNA的D-Loop区并测序。结果原代培养2-3 d后,镜下见单个细胞为梭形,呈铺路石样排列,1周后细胞趋于融合状态。内皮细胞生长抑制率：不同浓度(0.03mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml、1.0mg/ml)下的内皮细胞生长抑制率分别为(20.22%±2.97%)、(22.94%±4.52%)、(43.98%±3.35%)、(78.29%±3.85%),高浓度组显著高于低浓度组(P<0.05)。内皮细胞凋亡率：不同浓度组的内皮细胞凋亡率分别为(0.10%±0.01%)、(0.23%±0.02%)、(1.83%±0.04%)、(6.34%±0.11%)、(15.33%±0.53%),高浓度组的凋亡率高于低浓度组(P<0.05)。ROS值：不同浓度组分别为(57.35±7.11)、(120.47±15.68)、(166.15±11.57),糖皮质激素处理后的ROS值显著高于对照组,且高浓度组高于低浓度组(P<0.05)。XOD值：不同浓度组的XOD值分别为(0.0179±0.0009)、(0.0283±0.0017)、(0.0677±0.0041),糖皮质激素处理后的XOD值显著高于对照组,且高浓度组与低浓度组有显著差异(P<0.05)。与糖皮质激素组相比,经维生素C干预后,内皮细胞生长抑制率明显降低(P<0.05),且活性氧的生成减少(P<0.05)。骨坏死周围组织中mtDNA的突变情况、ROS浓度均高于正常组织(P<0.05)。结论糖皮质激素通过使血管内皮细胞内ROS生成增加,引起氧化应激反应,进而导致细胞功能受损,功能受损的程度与糖皮质激素浓度呈正比。维生素C能有效抑制糖皮质激素导致的内皮细胞的损伤,具有一定的保护作用。股骨头坏死周围组织中ROS浓度及mtDNA突变均高于正常组织,提示骨坏死的发生与ROS生成、mtDNA的突变具有一定关系。