目的：研究发现三种途径可致抑癌基因失活。第一，基因内突变，第二，染色体变异，第三启动子区DNA甲基化。启动子区DNA甲基化是一个化学修饰过程，中间由酶介导，属表观遗传学范畴。从而一些研究发现，某些抑癌基因，如P14^ARF, DAP-K和TIMP-3等的表达和食管癌的发展与转移有密切关系，基因启动子区甲基化后导致抑癌基因失活，功能丧失，随之患恶性肿瘤的几率明显增加。近年来，NSAIDS（非甾体类抗炎药），例如阿司匹林，吲哚美辛，塞来昔布等，可以降低患胃肠道肿瘤的风险，现已成为肿瘤防治领域的热点之一。流行病学研究显示服用非甾体类抗炎药能降低食管癌的死亡率。但是NSAIDS对食管癌甲基化的影响研究较少。本研究将观察食管癌患者中P14^ARF, DAP-K和TIMP-3等基因启动子的甲基化情况与塞来昔布（选择性抑制COX-2）对食管鳞癌P14^ARF, DAP-K和TIMP-3等基因启动子甲基化的影响。方法：1研究标本：选2012年6月至2013年1月河北医科大学第四医院胸三科食管上皮鳞状细胞癌患者13例，男性9例，女性4例，男女比例9:4，平均年龄60.85岁，患者术前、术后均经病理证实为食管鳞状细胞癌，均未行放化疗，均未长期服用阿司匹林等非甾体类抗炎药物，均无其他恶性肿瘤病史。实验组：患者服药前行胃镜检查并进行食管癌组织咬检，后嘱患者口服塞来昔布400mg/每次，2次/日，取术后大体病理标本。对照组：选取19例食管鳞癌患者，术前均未服用非甾体抗炎药，经术前各项检查后行食管癌根治术，术后选取该患者新鲜手术食管鳞癌标本。术前、术后取材时，标本离体后立即浸泡于事先准备好的later液中，并迅速转移至-80℃冰箱贮存以备用。2将对照组与实验组标本进行冰上研磨分别提取组织DNA与RNA，并置于-80℃冰箱保存以防降解。利用特异性甲基化PCR技术（MSP）对实验组和对照组进行甲基化检测，计算甲基化率，利用RT-PCR检测实验组中所测得P14^ARF、 DAP-K和TIMP-3基因启动子甲基化的同一个体前后mRNA表达。3检测实验组中服药前后标本的凋亡率。4利用SPSS软件对实验数据进行统计分析。基因甲基化状态与其临床病理学参数的关系应用χ²检验；甲基化率采用Fisher确切概率法检验；mRNA的表达分析与凋亡率的比较采用配对t检验统计。结果:1P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因启动子甲基化状态及其与临床病理学参数的关系P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因启动子在食管鳞状细胞癌组织中的甲基化率分别为38.4%、46.1%和30.8%。P14^ARF基因启动子甲基化状态与患者的年龄、性别无关（P均>0.05），与有无淋巴结转移（χ²=5.468，P=0.019）有关。DAP-K基因甲基化状态与患者的年龄、性别及有无淋巴结转移（P均>0.05）均无关。TIMP-3基因甲基化状态与患者的年龄和性别无关（P均>0.05），与有无淋巴结转移有关（χ²=5.468，P=0.019）。2实验组与对照组中P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因启动子区甲基化情况实验组中服药前P14^ARF基因启动子甲基化率为38.5%（5/13），对照组中甲基化率为47.4%（9/19），经塞来昔布处理后的去甲基化率为60%（3/5），对照组去甲基化率为0%（0/9），经Fisher确切概率法统计，χ²=6.382，P=0.027<0.05,差异有统计学意义。实验组中服药前DAP-K基因启动子甲基化率为46.1%（6/13），对照组中甲基化率为57.9%（11/19），经塞来昔布处理后的去甲基化率为50%（3/6），对照组去甲基化率为0%（0/11），经Fisher确切概率法统计，χ²=6.286，P=0.029<0.05,差异有统计学意义。实验组中服药前TIMP-3基因启动子甲基化率为30.8%（4/13），对照组中甲基化率为36.8%（7/19），经塞来昔布处理后的去甲基化率为50%（2/4），对照组去甲基化率为0%（0/9），经Fisher确切概率法统计，χ²=3.889，P=0.049<0.05,差异有统计学意义。3塞来昔布处理前后P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因mRNA表达量的比较经塞来昔布处理后P14^ARF基因mRNA的相对灰度值为0.56±0.046,明显高于经塞来昔布处理前的相对灰度值0.37±0.051，差异具有统计学意义（t=12.290P=0.000）。经塞来昔布处理后DAP-K基因mRNA的相对灰度值为0.53±0.117，明显高于经塞来昔布处理前的相对灰度值0.37±0.051，差异具有统计学意义（t=4.455P=0.011）。经塞来昔布处理后TIMP-3基因mRNA的相对灰度值为0.50±0.095，明显高于经塞来昔布处理前的相对灰度值0.38±0.049，差异具有统计学意义（t=4.600P=0.019）。4经塞来昔布处理前后细胞凋亡情况经塞来昔布处理前食管癌组织总体凋亡率为12.32±6.46%，经塞来昔布处理后食管癌组织总体凋亡率为19.18±6.09%，经配对t检验统计t=-11.507，P=0.000<0.05，差异有统计学意义。结论：1塞来昔布可以降低P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因启动子区甲基化程度。2塞来昔布可以提高P14^ARF、DAP-K和TIMP-3基因在食管鳞状细胞癌中的表达。3DAP-K基因甲基化状态与患者年龄、性别及淋巴结转移无关，P14^ARF和TIMP-3基因与患者年龄、性别无关而与淋巴结转移有关，提示P14^ARF和TIMP-3基因的甲基化检测对食管鳞状细胞癌患者的淋巴结转移有一定的指导意义。4塞来昔布可能通过抑癌基因P14^ARF、DAP-K和TIMP-3的去甲基化诱导食管鳞癌组织的凋亡。