论文部分内容阅读
宣威火腿中拥有着丰富的微生物资源,本文利用高通量测序技术对宣威火腿中的细菌群落结构进行分析,明确了宣威火腿中的细菌群落结构及组成。分别对两个品牌的宣威火腿采用试剂盒与SDS-CTAB法提取其细菌总脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA),应用16S核糖体RNA基因(16S rDNA)扩增子测序技术测定16S rDNA的V4变异区序列,微生物多样性分析表明:宣威火腿品牌二中的细菌群落多样性高于品牌一;采用SDSCTAB法提取细菌总DNA比采用试剂盒提取细菌总DNA更有利于反映细菌群落结构的多样性;在属水平,火腿品牌一中的优势菌群为四联球菌属(Tetragenococcus),品牌二中为不动杆菌属(Acinetobacter)。嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus,T.halophilus)在发酵食品中扮演着重要的角色,影响发酵食品的品质与风味。本研究结合传统形态观察法与现代分子生物学方法从宣威火腿中分离筛选鉴定49株嗜盐四联球菌。利用分离富集MRS培养基进行初级分离筛选富集培养,根据嗜盐四联球菌的groEL基因及16S rRNA基因进行PCR扩增验证筛选,并建立系统发育树以确定嗜盐四联球菌菌株种属关系。嗜盐四联球菌作为优势菌群存在于宣威火腿中并逐渐被作为发酵剂应用到一些盐渍发酵食品中,在细菌耐药性呈全球蔓延的形势下,对嗜盐四联球菌耐药性方面的安全问题进行评估十分有必要,以防菌株的耐药性基因被动员起来转移到其他细菌上,本研究中,利用纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)与常规聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法对其耐药表型和耐药基因进行检测,结果显示:49株分离株对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢拉定、头孢噻肟、四环素、米诺环素、多西环素、万古霉素完全敏感;49株对庆大霉素、链霉素、新霉素、多粘菌素B、复方新诺明耐药;32株对氧氟沙星耐药;4株对环丙沙星与氯霉素耐药;2株对头孢他啶与替卡西林耐药。26种耐药基因中,acrB、blaTEM、AAda1、SuI2、GyrB、EmgrB基因被检出,检出率分别为:89.79%、47.70%、16.33%、77.55%、75.51%、61.22%,其余耐药基因均未检测出。