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目的:通过从新生儿脐带体外分离出人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),检测含不同浓度二甲双胍(METF)培养液对细胞形态、细胞增殖、细胞表面标志表达及细胞周期的影响。方法:取健康足月新生儿脐带在体外分离出hUC-MSC进行传代培养,至第3代上流式细胞仪对细胞进行鉴定。待细胞培养至第7代时,加入含不同浓度二甲双胍的培养基(0mM、0.1mM、1mM、5mM、10mM、20mM)进行培养,在倒置显微镜下观察细胞形态,并拍照记录,通过MTT比色法分别于24、48、72小时,检测含有不同药物浓度的培养基对细胞增殖的影响,同时将与药物共同培养24h后的hUC-MSC用流式细胞仪分析细胞表面标志的表达,48h后分析各组细胞周期比例。结果:1.人脐带间充质干细胞的形态分析:二甲双胍浓度为0.1mM、1mM,细胞形态未发生显著改变,当药物浓度为5-20mM时,细胞形态随着药物浓度增加、培养时间延长,形态改变越显著。2.MTT比色法对各组细胞相对增殖率的测定:METF=0.1mM:24h 101.28±0.98,48h104.06±1.76,72h 101.51±0.67;METF=1mM:24h 116.03±1.82,48h 84.20±1.60,72h70.98±2.47;METF=5mM:24h 115.13±3.06,48h 64.64±1.20,72h 43.83±2.38;METF=10mM:24h 108.37±1.26,48h 59.69±1.90,72h 25.58±0.61;METF=20mM:24h86.64±0.66,48h 58.38±2.52,72h 17.75±1.35;根据实验结果可知:二甲双胍浓度为0.1mM时在能够促进hUC-MSC增殖,药物浓度为1-10mM在培养初期可增加hUC-MSC的增殖率,随着培养时间的延长,细胞的增殖逐渐被抑制。二甲双胍浓度为20mM抑制细胞增殖,抑制作用随着时间延长而增强(P<0.05)。3.流式细胞仪检测药物对各组细胞表面标志表达的影响:METF=0mM:CD44 0.75±0.18,CD90 96.96±0.44,CD105 72.80±2.90;METF=0.1mM:CD440.53±0.25,CD90 96.93±0.89,CD105 76.75±2.15;METF=1mM:CD440.53±0.08,CD90 97.54±0.22,CD105 72.88±2.37;METF=5mM:CD440.50±0.24,CD9097.21±0.47,CD105 66.52±2.70;METF=10mM:CD440.60±0.14,CD90 97.47±0.31,CD10566.74±4.33;METF=20mM:CD440.62±0.28,CD90 97.67±0.22,CD105 57.25±6.92;根据实验结果可知:当二甲双胍浓度为5mM、10mM、20mM时,随着药物浓度的增加,CD105的表达逐渐减弱(P<0.05)。当二甲双胍浓度为0.1mM-20mM时均未对CD44、CD90产生影响。4.流式细胞仪检测药物对各组细胞细胞周期的影响:METF=0mM:G0/G1(%)66.40±2.65,S(%)29.03±3.19,G2/M(%)3.56±2.20;METF=0.1mM:G0/G1(%)64.16±1.20,S(%)29.47±1.00,G2/M(%)6.37±0.40;METF=1mM:G0/G1(%)72.89±1.14,S(%)24.19±2.16,G2/M(%)2.34±1.02;METF=5mM:G0/G1(%)73.59±1.58,S(%)20.92±0.77,G2/M(%)5.48±0.84;METF=10mM:G0/G1(%)77.55±1.25,S(%)16.32±1.10,G2/M(%)6.18±1.01;METF=20mM:G0/G1(%)83.85±1.68,S(%)13.68±1.67,G2/M(%)2.47±0.23;根据实验结果可知:二甲双胍浓度为0.1mM时可降低G0/G1期的比例(P<0.05),可以促进hUC-MSC的增殖,随着药物浓度的增加,细胞增殖逐渐被抑制。结论:二甲双胍的药物浓度在0.1mM可以促进人脐带间充质干细胞的增殖,而在浓度5-20mM时抑制人脐带间充质干细胞的增殖及表面标志CD105的表达,不同浓度的二甲双胍均未对CD44、CD90的表达产生影响。