论文部分内容阅读
本试验旨在探索猪脂肪组织中锌α[2糖蛋白(zinc-alpha2-glycoprotein, ZAG)的表达与调控以及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)及其变体的分布情况。试验研究了断奶大白猪与二花脸猪背脂中ZAG基因的表达及其可能的转录调控机制,分析了梅山猪肾周脂与背脂,断奶阶段大白猪与二花脸猪背部皮下脂肪组织中GR及其变体的表达情况。1不同品种猪之间ZAG及脂代谢相关基因的表达研究选取35日龄断奶大白猪与二花脸猪,称重,断颈宰杀。宰后采集大白猪与二花脸猪颈背部脂肪,采用相对定量实时荧光PCR以及免疫印迹(Western blot, WB)方法检测断奶大白猪与二花脸猪背脂中ZAG及脂代谢相关基因如perilipin, FAS, HSL, PPAR γ,PPAR α,TNF-α, β3-AR,C/EBP-β,ATGL的表达。本研究首次得到全长为1090bp的猪ZAG基因序列,利用MegAlign软件与NCBI中序列进行比较,结果表明猪的ZAG基因的核苷酸序列与牛的同源性最高,为82.2%,与小鼠的同源性最低,为69.5%。二花脸与大白猪ZAG mRNA表达在肝脏中最高,明显高于其他组织,睾丸组织中表达量最低。大白猪背脂中ZAG mRNA与蛋白表达极显著高于二花脸猪(P<0.01)。ZAG可以与β3型肾上腺素能受体结合,大白猪背脂中β3-AR的mRNA表达极显著低于二花脸猪(P<0.01)。PPAR γ、TNF-α以及perilipin基因mRNA表达在两品种间无显著性差异。HSL与C/EBP β mRNA表达大白猪显著高于二花脸猪(P<0.05),但蛋白表达以及HSL的磷酸化蛋白表达无差异。而大白猪的脂肪酶活性显著性高于二花脸猪(P<0.05)。能量代谢关键基因CPT1与UCP2mRNA表达大白猪显著高于二花脸猪(P<0.05),UCP2蛋白表达大白猪显著高于二花脸猪(P<0.05)。本研究结果提示ZAG参与到猪脂肪代谢中并在一定程度上对不同品种猪之间的脂肪沉积造成影响,并且二花脸猪中较高的体脂沉积可能是其通过介导脂肪的分解以及机体产热的降低使脂肪的利用减少而导致的。2猪脂肪组织中GR及变体的表达及分布选取育肥阶段梅山猪以及35日龄断奶大白猪与二花脸猪,称重,断颈宰杀。宰后采集育肥梅山猪颈背部脂肪及肾周脂,断奶大白猪与二花脸猪颈背部脂肪,采用相对定量实时荧光PCR方法检测猪脂肪组织中GR及exon1变体的表达。结果显示,GR mRNA表达在育肥梅山猪背脂与肾周脂间无显著性差异,但是背脂exon1-7和exon1-9的mRNA表达显著高于肾周脂(P<0.05)。断奶大白猪背脂与二花脸猪背脂之间无显著性差异,然而断奶大白猪背脂中exon1-6的mRNA表达显著高于二花脸猪(P<0.05)。两品种exon1各变体启动子的甲基化程度虽然有个别位点是有显著性差异,但exon1-5与exon1-6之间的启动子部分以及exon1-6之前的启动子甲基化程度在两品种间没有差异,说明甲基化可能并不是造成exon1-6mRNA表达品种间差异的主要原因。以上结果提示虽然GR基因表达在不同部位脂肪组织,以及不同品种间没有出现显著性差异,但是exon1变体的表达存在差异,这种差异是否会导致脂肪组织中GR作用的发挥呈现差异需要进一步去探索。