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为探讨人乳头瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）基因分型与子宫颈鳞状细胞癌发生发展的分子病理机制，本课题进行了以下研究：HPV基因分型在宫颈细胞学筛查中的应用及意义；子宫颈癌及其癌前病变中HPV感染及其基因型分布；HPV感染相关子宫颈癌和癌前病变中细胞周期蛋白的表达特征及规律；HPV16E6、E7癌基因在转录水平沉默的途径及沉默后细胞周期蛋白的表达变化。收集2050例本院妇科门诊送检的宫颈脱落细胞，进行HPV基因分型检测；收集整理子宫颈癌及癌前病变和慢性宫颈炎石蜡组织标本，通过HE阅片筛选出129例标本入组，分为子宫颈鳞癌(squamouscarcinoma of the cervix, SCC)组、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelialneoplasia, CIN)组、慢性宫颈炎组；应用PCR-反向点杂交法进行子宫颈癌与癌前病变HPV基因分型检测，检测数据用SPSS13.0软件进行统计分析；选取79例宫颈病变石蜡标本进行p16、p21、p53、Rb、CyclinD1等指标免疫组化（SP法）染色；采用免疫组化、RT-PCR、Western blot技术检测子宫颈癌HCC94、SiHa细胞中p16、p21、p53、Rb、CyclinD1基因及其蛋白表达，利用基因转染技术研究SiHa E6、E7基因瞬时沉默后细胞凋亡以及关键信号分子p16、p21、p53、Rb、CyclinD1、ki67的表达情况。2050例宫颈上皮细胞标本中HPV感染阳性率为25.85%(530/2050)，最常见的类型依次为16、6、58、52、43型；109例子宫颈癌及其癌前病变标本中HPV阳性率为100％，最常见的基因型为HPV16型；随着病变程度的增加HPV单一感染比例逐渐升高，多重感染比例逐渐下降；p16蛋白在HPV(+)的子宫颈癌及其癌前病变中呈现过表达，在HPV(-)的正常组织中不表达；p53蛋白在正常宫颈组织中不表达，在SCC中偶见表达；Rb蛋白在正常宫颈鳞状上皮基底细胞中表达，在CIN与SCC中表达缺失；CyclinD1蛋白在正常宫颈组织和CINⅠ中表达，部分CINⅡ、CINⅢ、SCC中表达缺失；在HPV16(+)SiHa细胞中，p16表达在mRNA和蛋白水平均高于HPV(-)的HCC94细胞，而CyclinD1表达在mRNA和蛋白水平均低于HCC94细胞；应用RNAi技术可以将SiHa细胞中HPV16E6、E7基因沉默，沉默效率可达70%以上，沉默后E6、E7mRNA和蛋白表达同步下降，细胞凋亡率上升，Ki67基因表达下降，p21基因表达上升。宫颈细胞HPV基因分型对宫颈癌的早期筛查诊断具有重要意义；宫颈鳞癌及癌前病变发生与HPV感染直接相关，是高低危HPV亚型共同作用的结果，且高危型HPV持续感染是子宫颈癌及高级别癌前病变发生的必要条件；HPV16型病毒感染是国人子宫颈鳞癌形成的主要原因；p16、p21、p53、Rb、CyclinD1基因及蛋白的表达水平与HPV感染关系密切，其中子宫颈癌及其癌前病变中可见p16高表达及CyclinD1低表达，可作为辅助标记物用于子宫颈癌及癌前病变的病理诊断；靶向沉默HPV16E6、E7基因可有效抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡。上述实验为深入探讨HPV基因分型与子宫颈癌发生发展的分子病理机制奠定了基础。