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目的:设计并建立一个用于临床标本的体外NHEJ检测体系,以正常骨髓或外周血作对照,研究髓系白血病细胞非同源末端连接修复DNA双链断裂的能力和DNA断端连接的精确性。研究髓系白血病过度活跃的修复能力是否依赖NHEJ相关的主要蛋白质功能,以及髓系白血病细胞Ku蛋白和DNA依赖蛋白激酶的表达水平和基因表达情况。方法:正常骨髓或外周血单个核细胞、白血病细胞提取的核蛋白与线性的pUC18质粒DNA 在体外一定的条件下一起进行连接反应。结束后质粒DNA 经凝胶分离,用SYBR green I 染色成像。每个标本的DNA 末端连接能力以所连接的DNA 片段的辉度除以所有DNA 片段的辉度的百分比表示。以上述方法对7 种髓系白血病细胞株、淋巴系白血病细胞株Jurkat、骨髓瘤细胞株U266、5 种胶质瘤细胞株、16 例正常骨髓或外周血单个核细胞、20 例慢性粒细胞白血病细胞和19 例初诊的急性髓系白血病细胞进行检测。正常骨髓单个核细胞,初诊的慢性粒细胞白血病细胞,与K562 进行Co60辐照6Gy,培养1216 小时,进行连接实验,同时取照射后即时收集的细胞和自身对照作对比。慢粒白血病细胞用10μmol/L 三氧化二砷作用24 小时后检测DNA 连接能力。感受态大肠杆菌DH5α与正常骨髓和白血病细胞连接的质粒DNA 一起电击转化,培养于含X-gal 和IPTG 的LB 培养基琼脂板表面,质粒完整修复的菌落呈蓝色。若修复不准确菌落呈白色。错误修复率用白斑占所有形成的菌落克隆的百分比表示。设计围绕EcoR I 酶切位点的引物,对所有白斑和部分蓝斑进行PCR 分析,有意义的PCR产物进行测序。抗Ku70、Ku86 和DNA-PKcs 的抗体用来进行免疫去除后的连接实验。对髓系白血病细胞和正常骨髓细胞用Western Blot 和RT-PCR 分别检测Ku70、Ku86和DNA-PKcs 的蛋白表达水平和基因表达水平。结果: ①16 例正常骨髓或外周血单个核细胞的连接能力为0%～46.6%,平均为（18.6±13.1）%,7 种髓系白血病细胞株的连接能力为10.6%31.0%,平均为22.4%。与正常骨髓相比,无显著性差异（P>0.05）。其中SHI-1 的连接功能最差,低于正常骨髓和外周血的平均水平。Jurkat 的连接能力为32.9%, U266 的连接能力为60.6%,5种胶质瘤细胞株的连接能力为31.9%53.9%,平均为43.2%。20 例慢性粒细胞白血病