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目的:增殖和迁移是细胞参与各种细胞反应的关键行为，细胞生长因子发挥其生理功能的主要方式就是通过调节效应细胞的增殖和迁移。胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factorⅠ，IGF-Ⅰ)是影响肌肉卫星细胞功能状态的一个重要细胞因子，因此，对IGF-Ⅰ促进肌肉卫星细胞增殖、迁移机制的研究具有现实意义。mTOR/STAT3信号通路是细胞代谢和生长的中央控制器，对细胞的各项生命活动起着重要的调控作用，而本课题组前期实验发现STAT3蛋白在IGF-Ⅰ介导的成肌细胞增殖过程中发挥着重要作用。基于以上背景本文拟探讨mTOR/STAT3信号通路在IGF-Ⅰ诱导的成肌细胞增殖、迁移中的作用。 方法: 第一部分:应用MTT法检测10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的IGF-Ⅰ与2％FBS分别作用于L6成肌细胞24h、48h、72h的OD值;根据MTT结果选出适宜的IGF-Ⅰ浓度后，实时细胞分析系统(Real Time CellAnalyzer，RTCA)连续监测IGF-Ⅰ对L6成肌细胞增殖的影响;用RTCA法检测以上各组细胞在12h的穿膜细胞数，从而探讨IGF-Ⅰ是否可以促进成肌细胞迁移，并筛选其促进成肌细胞增殖、迁移的最佳浓度。 第二部分:根据第一部分实验结果，选取100ng/ml IGF-Ⅰ作用于L6成肌细胞，以2％FBS作对照，在0min，20min，30min，1h，2h，4h，12h，24h，48h后提取细胞总蛋白，利用免疫印迹技术(Western Blot)检测IGF-Ⅰ刺激成肌细胞后mTOR/STAT3信号通路活化水平，从而探讨mTOR/STAT3信号通路是否被激活。 第三部分:将细胞分为2％FBS对照组、50μmol/L雷帕霉素(rapamycin，RAPA)+100ng/mlIGF-Ⅰ处理组、100ng/mlIGF-Ⅰ处理组三组，用Western Blot观察各组目的蛋白磷酸化水平的变化，应用MTT法检测24h、48h、72h成肌细胞增殖的变化;用RTCA法检测12h成肌细胞迁移能力的变化，验证IGF-1促进成肌细胞增殖、迁移过程中mTOR/STAT3信号通路的作用。 结果: 第一部分:在同一时间，高浓度(50ng/ml，100ng/ml，200ng/ml)的IGF-Ⅰ具有促进L6成肌细胞增殖的作用(p＜0.05)，以100ng/ml，200ng/ml的IGF-Ⅰ促进作用更为显著(p＜0.01);10ng/ml则无明显促进作用(p＞0.05)。100ng/ml，200ng/ml的IGF-Ⅰ能有效促进L6成肌细胞迁移(p＜0.01)，而较低浓度(0ng/ml，10ng/ml，50ng/ml)的IGF-Ⅰ则无明显促迁移作用(p＞0.05)。 第二部分:实验组细胞各时间点之间哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(themammalian target of rapamycin，mTOR)及信号转导和转录激活因子3(signaltransducers and activators of transcription3，STAT3)总蛋白表达量无明显差异，然而mTOR及STAT3蛋白活化水平(p-mTOR、p-STAT3)均随IGF-Ⅰ作用时间延长而升高，在4h达到峰值，随后降低，然而在48h其蛋白磷酸化水平仍显著高于IGF-Ⅰ作用起始，差异有统计学意义(p＜0.05)，即IGF-Ⅰ作用下，mTOR/STAT3信号通路被激活。 第三部分:RAPA显著抑制了IGF-Ⅰ激活的目的蛋白磷酸化水平，且该通路抑制剂RAPA的加入显著降低了IGF-Ⅰ诱导的L6成肌细胞增殖及迁移能力，说明IGF-Ⅰ通过mTOR/STAT3信号通路促进了L6成肌细胞的增殖及迁移。 结论: 适宜浓度的IGF-Ⅰ对成肌细胞增殖、迁移有促进作用，这种促进作用与mTOR/STAT3信号通路的激活有关，但这并不是唯一的激活通路。