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番茄褪绿病毒Tomatochlorosisvirus(ToCV)是我国番茄生产上的重要病毒,主要由烟粉虱Bemisiatabaci进行半持久性传播,在田间能与番茄黄化曲叶病毒Tomatoyellowleafcurlvirus(TYLCV)复合侵染而造成番茄生产上重大的经济损失。组织蛋白酶是溶酶体内的主要蛋白酶,不仅协助溶酶体维持细胞稳态,还被作为消化酶从溶酶体中释放进入肠道用来消化昆虫摄食的蛋白质,在生物体的免疫以及肠道消化过程中起到非常重要的作用。本文研究了ToCV与TYLCV复合侵染情况下对ToCV传播的影响,并通过对取食不同侵染方式番茄的Q烟粉虱进行转录组测序筛选出具有显著差异的组织蛋白酶基因,随后对组织蛋白酶在烟粉传播ToCV过程中的作用机制进行了探究,为研究TYLCV和ToCV这两种病毒间的协生作用以及植物-病毒-媒介昆虫三者间的互作机制奠定基础。
主要结果如下:
1、传毒试验结果发现取食ToCV与TYLCV复合侵染番茄的烟粉虱传播ToCV的能力显著高于取食ToCV单独侵染番茄的烟粉虱:在复合侵染番茄上获毒48h后单头烟粉虱带毒率为80%,体内ToCV病毒量的拷贝数达到6.79×107copies/μL,显著高于在ToCV单独侵染番茄上取食烟粉虱的带毒率;复合侵染后25头烟粉虱的传毒率接近100%,而ToCV单独侵染后需50头烟粉虱传毒率才能达到100%。
2、通过对取食两种不同侵染方式番茄48h的Q烟粉虱进行转录组测序,共筛选出135个差异表达基因,其中有79个上调基因和56个下调基因。将这些差异表达基因与KEGG数据库进行比对,发现溶酶体通路中的差异表达基因数量最多,CathB与CathF为主要差异基因。
3、通过对取食ToCV侵染番茄不同获毒以及持毒时间的Q烟粉体内CathB与CathF活性进行测定,发现CathF活性在获毒前期即显著上升,CathB活性在烟粉虱体内ToCV含量达到饱和时显著上升。CathB与CathF活性在持毒过程中随着烟粉虱体内ToCV的流失而逐渐下降,在持毒4d时逐渐趋于正常水平。
4、通过酶抑制剂饲喂降低Q烟粉虱体内组织蛋白酶活性,对其获取、保留以及传播ToCV的能力进行了测定,发现组织蛋白酶抑制剂E-64抑制以后的Q烟粉虱在相同获毒以及持毒时间内体内ToCV含量显著高于对照组,20头烟粉虱获毒48h后传播ToCV的效率约为80%,显著高于对照组的56%,表明组织蛋白酶活性的降低提高了Q烟粉获取、保留以及传播ToCV的能力。
主要结果如下:
1、传毒试验结果发现取食ToCV与TYLCV复合侵染番茄的烟粉虱传播ToCV的能力显著高于取食ToCV单独侵染番茄的烟粉虱:在复合侵染番茄上获毒48h后单头烟粉虱带毒率为80%,体内ToCV病毒量的拷贝数达到6.79×107copies/μL,显著高于在ToCV单独侵染番茄上取食烟粉虱的带毒率;复合侵染后25头烟粉虱的传毒率接近100%,而ToCV单独侵染后需50头烟粉虱传毒率才能达到100%。
2、通过对取食两种不同侵染方式番茄48h的Q烟粉虱进行转录组测序,共筛选出135个差异表达基因,其中有79个上调基因和56个下调基因。将这些差异表达基因与KEGG数据库进行比对,发现溶酶体通路中的差异表达基因数量最多,CathB与CathF为主要差异基因。
3、通过对取食ToCV侵染番茄不同获毒以及持毒时间的Q烟粉体内CathB与CathF活性进行测定,发现CathF活性在获毒前期即显著上升,CathB活性在烟粉虱体内ToCV含量达到饱和时显著上升。CathB与CathF活性在持毒过程中随着烟粉虱体内ToCV的流失而逐渐下降,在持毒4d时逐渐趋于正常水平。
4、通过酶抑制剂饲喂降低Q烟粉虱体内组织蛋白酶活性,对其获取、保留以及传播ToCV的能力进行了测定,发现组织蛋白酶抑制剂E-64抑制以后的Q烟粉虱在相同获毒以及持毒时间内体内ToCV含量显著高于对照组,20头烟粉虱获毒48h后传播ToCV的效率约为80%,显著高于对照组的56%,表明组织蛋白酶活性的降低提高了Q烟粉获取、保留以及传播ToCV的能力。